参芎滴丸对MCAO大鼠EBA的研究.docVIP

参芎滴丸对MCAO大鼠EBA的研宄 摘要：目的探讨参芎滴丸对MCAO大鼠EBA 的影响。方法线栓法制备MCAO模型，在MCAO造 模前7d连续灌胃参芎滴丸预处理及在MCAO造模后 连续灌胃参芎滴丸3d，观察神经缺损评分，免疫组化 法检测EBA的表达。结果与MCAO组比较，参芎滴 丸预处理可提高EBA的表达（P 关键词：参芎滴丸；MCAO；大鼠；EBA；研究 血脑屏障能够调节中枢神经系统的水运输、水代 谢，并且参与限制血浆中溶质分子进人神经系统、维 持脑脊液生成、代谢等重要过程，以维持中枢神经系 统需要有一个高度可控非常稳定的微环境。Perdiki[l] 等研宄认为EBA是血脑屏障屏障功能完整性的可靠 指标。在急性缺血性卒中常伴见血脑屏障损害，脑水 肿出现，并加重缺血损害。参芎滴丸以益气活血化瘀 组方，以研宄其对EBA的影响。 1资料与方法 1.1实验动物及分组采用随机数字表随机分成7 组：正常组（6只）、假手术①组（6只）、MCAO①组 （6只）、参芎滴丸预处理+MCAO组（6只）、假手术 ②组（6只）、MCAO②组（6只）、MCAO+参芎滴丸 组（6只）。正常组不予处理，MCAO造模方法及假手 术组处理见上文。其中：参芎滴丸预处理给药研宄分 组：正常组、假手术①组、参芎滴丸预处理+MCAO 组、MCAO①组。参芎滴丸预处理+MCAO组于MACO 手术前lw灌胃给予参芎滴丸，正常组、假手术①组、 MCAO①组以等量生理盐水灌胃。术后24h动物处死， 进行各项指标检测。 参芎滴丸MCAO后给药研宄分组：正常组、假手 术②组、MCAO②组、MCAO+参芎滴丸组。MCAO+ 参芎滴丸组于手术后幵始灌胃给药，正常组、假手术 ②组、MCAO②组以等量生理盐水灌胃。术后72h处 死动物，进行各项指标检测。 1.2药品与试剂EBA、SC-7382 （兔抗大鼠IgG）， SUNTA CRUZ公司；辣根过氧化酶标记山羊抗兔IgG, SP9000Kit（鼠/兔）Lot724944A，山羊超敏二步法 Kit PV9003LotK105920B ,显色剂 DAB （Kit ZL1-9032 Lot457500A）,均购自北京中杉金桥生物技术有限公 司。 1.3模型的制备参照zeaLonga[2]等建立的大鼠 大脑中动脉内栓线阻断方法，具体步骤略。假手术组 只进行术前麻醉，血管分离术，暴露分离颈总动脉、 颈内动脉和颈外动脉，不结扎及导入栓线。 1.4入组标准参照Bederson[3]的方法，采用四级 评分法（0?4分），分数越高，说明其神经功能损伤越严 重。在参芎滴丸预处理给药研究中，造模后祌经功能 缺损评分分即纳入。在参芎滴丸MCAO后给药研 究中，神经功能缺损评分4即纳入。 1.5参芎滴丸实验中参芎滴丸灌胃剂量：10g （原 生药）/kg （临床剂量的10倍）；灌胃时配成混悬液， 每lml混悬液含5.5g原生药。 1.6 EBA的检测采用免疫组化方法，由四川省人 民医院实验动物研究所检测。 1.7统计分析采用SPSS17.0统计软件进行分析， 计量资料以x±s表示，组间比较用单因素方差分析进 行统计学处理，以P0.05;与正常组相比，* P0.05, 无统计学差异。 注：与正常组相比：?P0.05, * P0.05o 2.5病理结果EBA （X400）见图1?图5。 3讨论 本实验中参芎滴丸预处理治疗及MCAO后治疗 都可以改善MCAO大鼠神经症状学评分，提示具有祌 经保护作用。 EBA主要在具有血-脑屏障特性的毛细血管内皮 细胞有特异性的表达，其免疫反应性与血脑屏障的完 整性相关，与血脑屏障的物质转运及代谢等功能有联 系。 借助外源性示踪剂和电镜观察，通过静脉注射抗 -EBA抗体，结果发现：内皮细胞间连接变宽，胞浆 囊泡和空泡增加；许多微血管周围星形细胞足突肿胀; 大分子示踪剂在囊泡、空泡、变宽的旁细胞裂隙、血 管周围间隙和脑室中呈现。可见EBA与血脑屏障通透 性有关，EBA抗原-抗体免疫反应，引起EBA表达减 少，内皮细胞之间的紧密连接开放和跨内皮细胞胞质 囊泡增多，可能是血脑屏障通透性增加的可能机制之 一。柯昌庶等［4］研究大鼠实验性脑创伤挫伤灶内皮屏 障抗原的动态变化，伤后ldAQP4和EBA免疫反应性 明显消失。刘式威等［5,6］研究提示EBA表达减少和血 脑屏障通透性增加有关。 参芎滴丸是按5类新药要求由从丹参、川芎、黄 芪等中药中提取的多种有效成分制成的制剂，已经获 得发明专利(专利号码：ZL200910262686)，由成都 中医药大学药学院制备，灌胃时配成悬浊液，工艺略。 相关研宄提示参芎滴丸通过抑制脑缺血白细胞粘附分 子 CD11/CD18、ICAM-lmRNA、TNF-ctmRNA、NF- kB、caspase3的表达，抑制