微生物纯种分离与活菌计数法小.docVIP

综合性（设计性）实验 实验报告 实验名称:姓 名:指导教师:专 业: 实验名称: 姓 名: 指导教师: 专 业: 实验班级: 实验时间: 实验地点: 成 绩: 微生物纯种分离与活菌计数法 生物科学 微生物实验室 微生物纯种分离与活菌计数法 实验目的 了解从土壤中分离和纯化微生物的基本原理 掌握常用的微生物分离和纯化的方法（涂布平板法、平板划线分离法、稀释 倒平板法） 学;g通过平板菌落进行活菌技术的原理与方法 实验原理 自然界中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起，当我们希望 获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离它，以得到只含有这 一种微生物的纯培养。这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。常用 的方法有涂布平板法、平板划线分离法、稀释倒平板法、梯度稀释法等，最终 使单个微生物细胞在固体培养基上生长而形成单个菌落，从而获得若干个细菌 的纯培养。 为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧 等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此 菌生长，而抑制其它菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物i，然 后分离纯化该微生物，直至得到纯菌株。 实验方法 梯度稀释法 涂布平板法 平板划线分离法 稀释倒平板法 主要实验仪器与材料 高压蒸汽火菌锅、恒温电热干燥箱、生化培养箱 器材：酒精灯，电炉，接种环，无菌试管，三角瓶，记号笔，天平，火柴， 无菌培养皿，无菌移液管，玻璃涂棒，试管架、无菌生理盐水，盛无菌水并带 冇玻璃珠的三角烧瓶等。 实验步骤 （一）样品微生物的分离 祥品的称量：准确称取祥品10g 样品的预处理：将称取好的样品10g，放入盛90ml无菌水并带有玻璃珠的 三角瓶中，摇床约20min，使样品与水充分混合，将菌分散。 样品的稀释：梯度稀释法 取7—8支火菌空试管，用一支10ml无菌吸管分别加入9ml无菌水。 用一支lml无菌移液管取从预处理好的样品悬液中吸取1ml注入盛存9ml无菌 水中，充分混匀，然后按照以上发法依次稀释成10-2、10-3、……10~\ 10 O （二）样品微生物的纯化 （1） 涂布平板法：用移液枪分别取适合稀释度液lml于倒好的培养棊且凝 固好的培养皿屮，用无菌涂布棒将稀释液充分涂开，待干。每个稀释梯度一般 2-3个平行。 （2） 平板划线分离法：用移液管分别取适合稀释度液（一般取3个梯度） 于倒好培养棊且凝固好的培养皿上按“Z”形划线。 （3） 梯度稀释法：用移液管分别取不于同浓度的稀释液，将其均匀分布于 平板培养棊上。 （4） 稀释倒平板法：分别取不同稀释液少许，与已溶化并冷却至45 °C左 右的琼脂培养棊混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿屮，待琼脂凝固后，制成 可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出出菌落。 （三） 样品微生物的培养 培养条件：细菌一般是32.5±2.5°C 培养时间：细菌2天 （四） 样品微生物的计数 首先选取平均菌落数在30-300个之间的平皿，作为菌落总数测定的范围。当只 有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数。 实验记荥： 适于计数的平板上的菌落数在30-300之间， 细菌稀释度为：104 105 106 放线菌稀释度为：103 104 105 真菌稀释度为：102 103 104 计数时每隔24h统计菌落数，菌落特征包括：形状大小颜色隆起程度 等。 实验结果与讨论 制备培养棊时，加热溶解琼脂时要不断地搅拌，防止液体剧烈沸腾溢出。 接种操作时尽量避免外界细菌的渗入，使得培养棊屮菌落参杂Y杂菌 划线时应严格按照老师的要求，熟练操作，尽量划线均匀 实验结果： 纯种分离是微生物实验常用的技术，在实验屮常常被我们使用。 计数法分为直接计数法和间接计数法。直接计算法常用显微镜技术，但是 不能区分死菌和活菌，难以计数微小的细菌。 间接计数法常用的是稀释涂布平板计数，稀释度很重要，一般选用三个稀 释度屮的第二个稀释度作为最佳，因为平均菌落数为最好。