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慢性HBV感染患者机体免疫状况检测分析 R511 A 文 章编号 1672 — 3783(2011)12 — 0282 — 01 目的检测分析慢性HBV感染患者机体 免疫状况对于HBV DNA水平及HBsAg的影响。方法: 选择我院2009年2月至2011年2月90例慢性HBV 感染患者，按照疾病严重程度，分为观察组A (慢性 重症肝炎)、观察组B (慢性乙型肝炎)和观察组C (肝 硬化)，各30例，分别采取ELISA试验和流式细胞仪 进行全血及血清的细胞因子白细胞介素2(IL-2)、IL10、 HBV—M、淋巴细胞亚群的CD4+、CD8+T细胞检测， 采取PCR试验对HBV DNA进行检测，观察分析检测的 结果。结果观察组A和观察组C的IL-2、IL-10、淋 巴细胞亚群的CD4+、CD8+T细胞与HBsAg、HBV DNA 检测结果之间无明显相关(P0.05),无统计学意义。 观察组B的淋巴细胞亚群的IL-2、CD4+T细胞与HBV DNA 之间呈现负相关(r=0.194, -0.566, P=0.001), 具有统计学意义。观察组B的IL-10、淋巴细胞亚群的 CD8+T细胞与HBV DNA检测结果之间无明显相关 (r=0.213, 0.323, P=0.405),无统计学意义。结论 慢性HBV感染患者不同疾病类型的机体免疫状况对于 HBsAg、HBVDNA有不同的影响，慢性乙型肝炎的淋 巴细胞亚群的CD4+T细胞对HBsAg、HBV DNA有明显 的抑制作用。 关键词 慢性HBV感染 机体免疫状况HBVDNA 水平HBsAg HBV引起的慢性肝病其发病机制目前仍未明确, 临床上一般认为，HBV感染与机体的免疫功能变化有 一定的相关性，本文通过检测分析慢性HBV感染患者 机体免疫状况对于HBV DNA水平及HBsAg的影响，总 结如下 1资料与方法 一般资料 选择我院2009年2月至2011年2 月90例慢性HBV感染患者，男51例，女39例，年 龄在24~52岁，平均年龄为37.8±0.7岁，均符合2000 年中华医学会在西安会议上修订的《病毒性肝炎防治 方案》的诊断标准，按照疾病严重程度，分为观察组 A （慢性重症肝炎）、观察组B （慢性乙型肝炎）和观 察组C （肝硬化），各30例，分别采取ELISA试验和流 式细胞仪进行全血及血清的细胞因子白细胞介素2 （IL-2）、IL10、HBV—M、淋巴细胞亚群的 CD4+、CD8+T 细胞检测，采取PCR试验对HBV DNA进行检测，观察 分析检测的结果。三组患者从年龄、性别等方面对比 无显著差异(P0.05),具有可比性。 仪器与试剂(1) HBV—M、IL-2、IL10 检测: 采用上海实业科华生物技术有限公司提供的试剂盒， 酶标仪，Wdlsean洗板机(Labsystems提供，型号 MK )； (2) CD4+、CD8+T细胞检测流式细胞仪(型 号EPICS XL) 软件 SYSTEMII； (3) HBV DNA 检测 采用洛阳华美生物工程公司提供的试剂盒，电泳仪 (EPS300),单槽式扩增仪(型号黑马8000)o 1.3方法 1.3.1样本采集与处理在患者上臂采集3~5ml的 静脉血，在37oC下进行全血孵化20分钟后，给予离 心试验，选择2400r/min,离心lOmin后，分离取出 上清液(血清)，保存在-20oC下备用待测。 检测方法 (1) HBV—M、IL-2、IL10 检测: 进行酶联免疫吸附实验，即ELISA试验，操作方法及 结 果判断严格按试剂盒上的要求进行。(2) CD4+、CD8+T 细胞检测校准好光路及流路，保证所有荧光信号的 变异系数(CV)均V2%。异硫氧酸荧光素(FITC)为荧光I, 藻红蛋白(PE)为荧光II,藻红蛋白-花青昔(PE-Cy5)为荧 光IV,滤光片的波长分别是525、575、675nm,然后 对荧光阴性的范围，即阴性对照进行确定，对PMT电压进行校准，对颜色进行补偿，对淋巴细胞的检测进 行参数测定，平均每份标本可测定细胞个数为5000 个，测定出来的数据均采用流式细胞仪及SYSTEMII 件进行分析。(3) HBV DNA检测使用聚合酶链反应 (PCR)技术进行试验，灵敏度在10-5Pg/ml,在进行血 清HBV DNA检测前，应先对样品进行制备，将血清从 -20°C下取出，解冻后，取出lOOPl加入到10%的10 Hl的SDS及20mg/ml的蛋白酶K中，在37°C下放置 过夜消化后，使用酚氯进行仿抽提两次，再在-20°C 下以无水乙醇进行沉淀，沉淀物应用20卩I的TE进行 溶解。将制备好的血清样品进行PCR试验，每次PCR 操作均设置成阴性、阳性对照试验。在紫外灯下对扩 增结果进行判读，阳性标