山银花有效成分的分析和提取以及抑制巨噬细胞胆固醇蓄积作用的研究-药理学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 10 不同，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇 相、水相等不同的组分。以石油醚相（药物 1）、乙酸乙酯相（药物 2）、正丁醇相（药 物 3）作为受试药物。体外培养鼠源性巨噬细胞（RAW264.7 细胞），不同浓度的脂肪 乳（20%脂肪乳与培养基比例分别为 0:1、1:6、1:5、1:4、1:2、1:1）孵育 RAW264.7 细胞，再以最佳浓度脂肪乳孵育细胞不同时间（0、3、6、12、24、48h），油红 O 染色法观察细胞荷脂情况。进一步实验将细胞分成 5 组，即正常组、荷脂组（10%脂 肪乳组）、10%脂肪乳+药物 1 组、10%脂肪乳+药物 2 组、10%脂肪乳+药物 3 组，油 红 O 染色法观察细胞内脂粒变化，Western 印迹法检测小凹蛋白-1（caveolin-1）的表 达，反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测 SREBP-1 的 mRNA 表达。 结果：油红 O 染色显示，在一定浓度和时间范围内，细胞中脂粒随脂肪乳浓度 升高和荷脂时间的延长而增多，10%脂肪乳荷脂 24h 使细胞荷脂情况最佳；不同因素 处理细胞 24h，油红 O 染色显示，药物 1 组、2 组、3 组均使荷脂细胞的脂粒减少, 且药物 2 组使脂粒减少最明显。Western 印迹结果显示，荷脂组较正常组 caveolin-1 表达下调，药物 1、2、3 组 caveolin-1 的表达均较荷脂组有上调趋势，且药物 2 组上 调最明显；免疫荧光检测显示，与荷脂组比较，药物 1、2、3 组能上调 caveolin-1 表 达，且药物 2 组上调最明显。RT-PCR 结果显示，荷脂组较正常组 SREBP-1 的 mRNA 表达上调，药物 1、2、3 组 SREBP-1 的 mRNA 表达均较荷脂组下调。 结论： 1. 山银花提取物（药物 1、2、3）具有抑制巨噬细胞胆固醇蓄积的作用，且药 物 2 的作用较强； 2. 山银花提取物抑制巨噬细胞胆固醇蓄积的作用可能与上调 caveolin-1 表达有 关； 3. 药物可能通过抑制 SREBP-1 的表达而上调 caveolin-1 的表达。 关键词：RAW264.7 细胞；胆固醇蓄积；Caveolin-1；SREBP-1 Effective component analysis and extraction of Flos Lonicerae (Japonicae). and studies of extraction inhibiting macrophage cell cholesterol cumulative action Abstract Part 1: An effective component analysis of Flos Lonicerae Japonicae. Objective: To perform an effective component analysis of Flos Lonicerae Japonicae. Methods: The HPLC method was used for determination the content of chlorogenic acid in Flos Lonicerae Japonicae. Chromatographic column was VP-ODS C18 column (150mm×4.6mm) and the mobile phase was acetonitrile-0.4% phosphonic acid (13:87), detection wavelength was 327nm. The UV-VIS was used to determine absorption of Flos Lonicerae Japonicae. solution on 490nm detection wavelength. With the rutin as comparison, the content of flavonoids was calculated; The HPLC method was used to determine the content of luteoloside in Flos Lonicerae Japonicae. A VP-ODS C18 as the column (150mm×4.6mm) and the methyl cyanide as mobile phase A, 0.5% glacial acetic acid solution as mobile phase B, 350nm as dete