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Abstract
Theseresults thatKSDDisa inthebioconversionofADinto
suggest keyenzyme ADD，
andit the
lay foundationforfurtherresearch．
．△kdehydrogenase．
11
目录
目 录
摘要…………………………………………………………………………………………．I
Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．I
第一章引言……………………………………………………………………………………1
1．1甾体药物研究进展…………………………………………………………………一1
1．1．1甾体化合物概述………………………………………………………………1
1．1．2甾体药物概述…………………………………………………………………．1
1．1．3雄甾烯酮概述…………………………………………………………………2
1．2植物甾醇微生物转化合成AD(D)的研究进展……………………………………．3
1．2．1选择性甾体边链降解技术……………………………………………………3
1．2．2甾醇新型转化体系研究进展…………………………………………………4
1．3甾体微生物转化过程中关键酶KSDD研究………………………………………．．5
1．3．1KSDD的性质…………………………………………………………………．5
1．3．2KSDD研究进展………………………………………………………………．5
1．4本课题立题意义和主要研究任务…………………………………………………．．6
第二章实验材料与方法………………………………………………………………………9
2．1实验材料……………………………………………………………………………．．9
2．1．1实验仪器………………………………………………………………………9
2．1．2菌株与质粒……………………………………………………………………9
2．1．3工具酶与试剂…………………………………………………………………9
2．1．4培养基及培养条件……………………………………………………………10
2．2实验方法……………………………………………………………………………10
2．2．1
PCR引物…………………………………………………………………………………………．10
2．2．2分枝杆菌染色体DNA的制备………………………………………………11
2．2．3
PCR反应体系及反应条件…………………………………………………。11
2．2．4 vector连接………………………………。1l
PCR产物回收以及与pMDl8．T
2．2．5大肠杆菌感受态细胞的制备…………………………………………………11
2．2．6大肠杆菌热击转化……………………………………………………………12
2．2．7转化子的筛选与鉴定…………………………………………………………12
2．2．8质粒提取步骤………………………………………………………………。12
2．2．9大肠杆菌重组表达载体的构建及ksdD基因的诱导表达…………………12
2．2．10重组大肠杆菌SDS．PAGE分析……………………………………………12
2．2．11分枝杆菌感受态细胞制备…………………………………………………12
2．2．12分枝杆菌电击转化………………………
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