课件：二糖和苷.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * 四、苷分子中苷元和糖、糖和糖之间连接位置的确定 (一)苷元和糖之间连接位置的确定 1、以前通过分析由化学降解或酶解得到的产物来确定糖与苷元之间的连接位置 2、现在这种方法逐渐被NMR谱的解析所取代。 13C-NMR谱中，苷元羟基因与糖结合成苷，故可产生苷化位移。利用苷化位移规律，将苷和苷元的碳谱相比较，就可以很容易地辨别出苷元的哪个碳原子与糖相连接。 六、糖链结构的测定 (二)糖与糖之间连接位置的确定 可采用化学方法或光谱(NMR)分析法进行。 1．化学方法部分水解法 1）以缓和酸水解和酶水解法最为常用。缓和酸水解多使用低浓度的无机强酸或中强度的有机酸(如草酸)进行水解，可使苷中的部分糖水解脱去。例如： 六、糖链结构的测定 2）利用苷的乙酰解，使开裂一部分苷键，保留另一部分苷键，分析水解产物中得到的乙酰化低聚糖，也可以确定糖的连接顺序。 3）此外还可以将苷的全甲基化物进行甲醇解（类似于水解），然后分析其甲醇解产物，也可以获得有关糖与糖之间连接顺序的信息。 六、糖链结构的测定 一般方法是：先将苷进行全甲基化，然后用含6％~9％盐酸的甲醇进行甲醇解（类似于水解） ，即可得到末完全甲醚化的各种单糖，而连接在最末端的一定是全甲醚化的单糖。根据这些甲醚化的单糖中羟基的位置，即可对糖与糖之间的连接位置作出判断。 采用的方法通常是将这些甲醚化的单糖进行了TLC鉴定，并与标准品对照。近来亦有用GC-MS联用仪对其进行鉴定的报道。全甲基化苷的甲醇解反应如下： 六、糖链结构的测定 如： 上式中，苷通过全甲基化及甲醇解反应后，将甲醇解的产物进行TLC鉴定。由于后者是全甲基化的木糖，因此可推断木糖是在末端，而前者是未完全甲醚化的葡萄糖，在其C3位上有一羟基，因此可推断它不仅与苷元相连，并在C3位上与木糖相连接。 六、糖链结构的测定 苷的甲基化反应常用的方法主要有以下四种，前两种为经典的方法,后两种是半微量的现代方法。 (1)Haworth法：用硫酸二甲酯和氢氧化钠(或碳酸钠、碳酸钾)，其缺点是甲基化能力较弱，如果欲进行全甲基化反应，必须进行多次反应才能达到目的， (2)Purdie法：用碘甲烷和氧化银为试剂(一般可在丙酮或四氢呋喃中进行)，，但因氧化银具有氧化作用，只能用于苷的甲基化．而不能用于还原糖的甲基化。 六、糖链结构的测定 (3)Kuhn改良法：在二甲基甲酰胺(DMF)溶液中，加入碘甲烷和氧化银或硫酸二甲酯及氢氧比钡(或氧化钡) 。本法的缺点是反应较缓慢。 (4) Hakomari法(箱守法)：在二甲基亚砜(DMSO)溶液中，加入氢化钠，以碘甲烷进行甲基化反应，可以迅速完成。 六、糖链结构的测定 此法反应迅速、完全、无需特殊装置、可在室温下连续反应，是目前最常用的全甲基化方法。但因在反应中，所用二甲亚砜和NaH均呈强碱性，故分子中有酯键的苷类不宜用本法，而应采用Kuhn改良法进行全甲基化。 六、糖链结构的测定 五、苷键构型的确定 糖与苷元之间的苷键及糖与糖之间的苷键属于缩醛键，因而都存在有糖端基碳原子的构型问题。确定苷键构型的方法主要有以下几种。 (一)利用酶水解进行测定 如麦芽糖酶一般能水解的为α-苷键，能被苦杏仁苷酶水解的大多为β-苷键。利用酶解法推断苷键构型时需注意并非所有的β-苷键都能被苦杏仁苷酶所水解。 (二)利用NMR谱法测定 1 利用糖端基C1-H和C2-H的偶合常数 2 利用糖端基质子C1-C和C1-H的偶合常数 3 利用糖端基C1的13CNMR特征 六、糖链结构的测定 一、概述 二、单糖的立体化学 三、糖和苷的分类 四、苷类化合物的理化性质 五、苷键的裂解 六、糖和苷的提取分离 七、糖链的结构测定 八、糖的核磁共振性质 第二章 糖和苷 一 、糖的1HNMR特征 化学位移规律： 端基质子： 4.3~6.0ppm 特点：比较容易辨认 用途：1 、确定糖基的个数 2、 确定糖基的种类 3 、2D-NMR谱上糖信号的归属 4 、糖的位置的判断 七、糖的NMR特征 七、糖的NMR特征 甲基质子： ~1.0