肝移植术后不同免疫只状态下cd4cd5foxp3调节性t细胞及其cd45亚群的相关研究.docx

天津医科大学博士学位论文中文捅姜 天津医科大学博士学位论文 中文捅姜 研究目的：本研究旨在通过对肝移植患者外周血CD4十CD25+Foxp3+调节性T细 胞(Regulatory T cell，Treg)及其CD45亚群在不同免疫状态下的表达、变化及 影响因素的研究，深入探讨CD4+CD25+Foxp3+Treg在肝移植免疫耐受中的作用 机制。 研究内容：以肝移植患者为研究对象，观察CD4+CD25+Foxp3+Treg及其CD45 亚群在外周血中的变化；以外周血CD4+T淋巴细胞ATP含量评估肝移植患者免 疫状态；探讨不同免疫状态下Treg在肝移植患者中的表达。 研究方法：第一部分：随机选取肝移植术后6个月以上、临床状态稳定的患者 91例，作为肝移植术后组；选取终末期肝病、在观察期内行肝移植术患者23例， 作为手术对照组，分别在肝移植术前、术后1个月、3个月、6个月时行Treg检 测。所有标本在荧光抗体染色后，以流式细胞仪检测CD4+CD25+Foxp3+Treg及 其CD45RA、CD45RO、CD31分子的表达，分析年龄、术后时间、免疫抑制剂 类型及浓度、肝移植术等因素对CD4+CD25+Foxp3+Treg的影响。第二部分：随 机选取肝移植术后患者1 89例，利用ImmuKnow方法检测患者外周血CD4+T淋 巴细胞ATP水平，分析性别、年龄、术后时间、排斥反应、感染等因素对其影 响。根据CD4+T淋巴细胞ATP水平分为低免疫应答组(225 ng／mL)、正常免 疫应答组(225．525 ng／mL)和高免疫应答组(525 ng／mL)，比较各组间排斥反 应和感染的发生率。第三部分：以肝移植术后6个月以上、服用他克莫司(FK506) 的肝移植患者为研究对象，按临床状态将所有患者分为感染组、排斥组和稳定 组，比较各组间CD4+CD25+Foxp3+Treg比例及数量的差异。比较低免疫应答组、 正常免疫应答组和高免疫应答组三组间CD4+CD25+Foxp3+Treg比例及数量的差 异，并分析其与CD4+T淋巴细胞内ATP的相关性。 研究结果：第一部分：肝移植术后患者CD4+CD25+Foxp3+Treg的数量显著低于 健康对照组(2．79x10 7／L+2．02x10 7／L VS 4．29x10 7／L+2．40x107／L，P=0．005)。免疫 抑制剂的类型和浓度对其影响明显。雷帕霉素(Rapa)组中 CD4+CD25+Foxp3+Treg比例为 10．36％_a：2．52％， 明显高于FK506组 (6．97％_4：3．28％，P=0．004)与健康对照组(6．66％2．41％，P=-0．005)。以FK506 谷值浓度7．0 ng／mL为标准，将其分为高浓度组与低浓度组，低浓度组中 CD4+CD25+Foxp3+Treg比例为7．56％3．31％，明显高于高浓度组的4．84％2．11％ 天津医科大学博士学位论文(仁0．001)。CD4+CD25+Foxp3+Treg比例在肝移植后逐步下降(P=-0．003)，肝移 天津医科大学博士学位论文 (仁0．001)。CD4+CD25+Foxp3+Treg比例在肝移植后逐步下降(P=-0．003)，肝移 植术前(10．990／硅5．49％、)高于术后1个月(7．59％士4．20％)、3个月(6．26％+2．98％) 和6个月(5．650／硅2．97％)，亦明显高于健康对照组(6．660／挂2．41％)(P值均小 于0．05)。CD4+CD25+Foxp3+Treg中激活型CD45RO+Treg比例显著高于初始型 CD45RA+Treg(71．770,,硅14．66％ITS 14．640／社11．08％，P=0．000)，但二者表达CD31 的比例无差异(P=-0．5 1 7)。CD45RA+Treg表达Foxp3的比例为77．040／社20．69％， 高于CD45RO+Treg的70．770／社19．08％(P=-0．002)，并且CD45RO+Treg的比例与 患者年龄正相关(产0．526，P=-0．000)，而CD45RA+Treg与年龄负相关(F一0．325， P----0．003)。第二部分：共对189例患者进行290例次外周血CD4十T淋巴细胞ATP 检测，低免疫应答组、正常免疫应答组和高免疫应答组排斥反应发生率分别为 O．9％、3．4％和15．8％，存在统计学差异(卢0．021)；感染发生率分别为20．7％、 13．7％和5．3％，存在统计学差异(P=-0．000)。第三部分：不同临床状态下， CD4+CD25+Foxp3+Treg在CD4+T细胞中的比例存在差异(P=-0．010)，排斥组比 例(4．380／硅1．22％)分别低于稳定组(6．970