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兰州大学硕士学位论文肝细胞肝癌中STAT3和c．myc作用的初步研究 兰州大学硕士学位论文 肝细胞肝癌中STAT3和c．myc作用的初步研究 中文摘要 目的(1)检狈IJSTAT3蛋白及c．myc蛋白在肝癌SMMC．7721细胞以及肝细胞肝癌组织中 的表达。 (2)抗体干预后观察STAT3及c-myc对肝癌SMMC一7721细胞增殖和凋亡的影响以 及两者的相互关系，探讨两者在肝癌发生发展中的作用。 方法(1)免疫细胞化学及RT．PCR方法观察STAT3,及c．myc在肝癌细胞SMMC．7721中 的表达。 (2)免疫组织化学方法检测STAT3蛋白及c．myc蛋白在肝细胞肝癌组织中的表 达。 (3)分别单独应用STAT3及c．myc的抗体及两种抗体联合应用后，MTT法检测肝 癌细胞SMMC．7721的增殖情况，应用流式细胞仪检测细胞凋亡，RT-PCR 技术检测STAT3及c．myc mRNA表达的变化。 结果 (1)STAT3／3f．．c—myc在肝癌细胞sMMc．7721中均有表达。sTAT3蛋白和c—myc蛋 白均主要表达于细胞浆。 (2)应用抗STAT3抗体干预后检测到肝癌细胞SMMC．7721增殖受到抑制，呈现 时间、剂量依赖性。201ag／mL处理组和40I-tg／mL处理组与lO Lug／mL处理组比 较，抑制率具有显著差异(尸0．05)。201ag／mL处理组和4％g／mL处理组比 较，抑制率无显著差异胗O．05)。 (3)应用抗c．myc抗体干预后SMMC．7721细胞增殖受到抑制，细胞活力下降，呈 现时间、剂量依赖性，20pg／mL处理组君lJ4009／mL处理组与10pg／mL处理组 比较，抑制率具有显著差异(尸O．01)。2％g／mE处理组和40pg／mL处理组比 较，抑制率无统计学差异(P0．05)。 (4)联合应用抗STAT3及抗c．myc抗体干预后，MTT结果显示对细胞增殖的抑制 兰州大学硕士学位论文作用呈时间、剂量依赖性。在24h处理组和48h处理组，联合应用抗体对 兰州大学硕士学位论文 作用呈时间、剂量依赖性。在24h处理组和48h处理组，联合应用抗体对 SMMC．7721细胞增殖的抑制率高于单用一种抗体处理组，具有统计学差异 (氏0．05)。72h处理组与单用一种抗体处理组相比，抑制率无统计学意义 胗O．05)。 (5)流式细胞术检测显示单独应用抗STAT3和抗c．myc抗体及两者联合应用后， 细胞的早期凋亡率从对照的0．88％增加到7．12％、10．6％和15．5％，晚期凋亡 细胞比率从对照的1．00％增加到3．12％、5．32％和7．14％，联合应用抗STAT3 及抗c．myc抗体处理的细胞凋亡率高于单用一种抗体处理组。 (6)RT．PCR{佥i贝WJ显示应用抗STAT3抗体作用于细胞48h，c-myc mRNA的表达 下降；联合应用两种抗体处理细胞48h，c．myc mRNA的表达明显降低， (7)联合应用抗体作用于细胞48h，RT-PCR检测显示STAT3 mRNA的表达较对 照组降低。 (8)STAT3在33例肝细胞肝癌组织中表达，c．myc在32例肝细胞肝癌组织中 表达，不同分化程度的肝细胞肝癌中STAT3，c．myc的表达差异有统计学意 义(PO．05)。 结论 (1)肝癌细胞SMMC．7721中存在STAT3及c．myc信号的过度激活。 (2)抑制STAT3基因或者c-myc基因以及同时抑制STAT3和c-myc基因可以抑制 肝癌SMMC．7721细胞增殖，诱导细胞凋亡。提示STAT3基因和c．myc基因在 肝癌的发生发展中发挥了重要作用。 (3)STAT3：g]c-myc基因在人肝细胞肝癌组织中过表达，STAT3，c-myc的表达 强度与肝细胞肝癌的病理分级呈正相关，提示STAT3和c．myc基因参与了肝 癌的恶性转化。 (4)抗STAT3抗体作用于肝癌SMMC．7721细胞，可以抑专fJc-myc基因的表达，提 示STAT3可能通过上调C．myc而抑制肝癌细胞凋亡，促进细胞增殖。 关键词 肝细胞肝癌；STAT3；c．myc；增殖；凋亡；免疫组织化学；MTT；流式细胞 术：RT．PCR Ⅱ 兰州大学硕士学位论文The 兰州大学硕士学位论文 The study of effect of STAT3 and c-myc in HeDatocellular carcinoma ABSTRACT objective(1)To investigate the expression of STAT3 and c—myc proteins in SMMC一772 1 cell line and human Hepatocellular carcinoma． (2)To evaluate