进行病原性细菌的分离鉴定如何才能提高检出率？.pptVIP

七、培养基的质量控制—理化指标 pH值：25℃时的测定值，±0.2 比色法：用指示剂在不同pH溶液中的颜色变化，与标准比色管或比色板相比 电极式pH计：用可测定固体的特殊电极 pH值、凝胶强度、色泽、澄清度、水分含量 七、培养基的质量控制 —微生物学方法 灵敏度测定法 混合增菌培养法 测定增菌倍数法 特异性测定方法 七、培养基的质量控制 —营养培养基 灵敏度测定法 质控菌株：乙型溶血性链球菌 32210 短小芽孢杆菌 7316 实验方法 1.制备实验菌108菌悬液，10倍稀释至10-8 2.选取适宜的3~4个连续稀释度，接种1mL于9mL待测试的培养基中，每个稀释度接种3管，37℃培养3天 3.以接种管2/3生长的最高稀释度为该培养基灵敏度 七、培养基的质量控制 —选择性增菌培养基 混合增菌培养法(SC肉汤) 质控菌株：鼠伤寒沙门氏菌和大肠杆菌 实验方法 将沙门氏菌和大肠杆菌肉汤新鲜培养物按1:99 混合，接种SC肉汤，35℃18~24h，适当稀释，涂布麦康凯琼脂，平板上应90%以上为沙门氏菌,大肠杆菌菌落应10%。 七、培养基的质量控制 —选择性增菌培养基 测定增菌倍数法(TTB) 质控菌株：鼠伤寒沙菌和粪链球菌 实验方法 增菌后平板菌落计数平均值×105 增菌前平板菌落计数平均值 沙门菌增菌倍数= ≥105 增菌后平板菌落计数平均值×105 增菌前平板菌落计数平均值 粪链球菌增菌倍数= ≤102 合格指标：沙门菌应增菌105倍以上 大肠杆菌和粪链球菌增菌应低于102 七、培养基的质量控制—选择性分离培养基 含菌量约100~1000CFU 菌悬液涂布平板 按ISO/TS11133-1要求，接种目标阳性菌、弱生长阳性菌株、呈现不同生化特性的菌株和非目标菌（被抑制菌株） 观察菌种的典型生长情况，并通过灵敏度、特异性对培养基的质量进行控制 灵敏度：目标菌100~1000 cfu/板 特异性：目标菌生长良好，特性典型，非目标菌 不生长 干粉培养基使用注意事项 摇匀后准确称量 蒸馏水或去离子水配制 用中性玻璃质容器 加热溶解时适当搅拌，不能过度加热 含琼脂的培养基灭菌后，不能长时间处于高温状态 干粉培养基保存 阴凉、干燥、避光保存，不能放置冰箱保存，防止受潮结块 保质期：开封后6个月 称量后迅速拧紧瓶盖，潮湿结块不能再使用 物质储备 知识储备 责任心、事业心、荣誉感 团结合作：科室内、外科室 耐心、信心 只有有所为，才能有所地位 提高检出率的方法 用阳性、阴性菌株与标本同步进行试验，特别是生化反应 八、设阳性、阴性对照 1.样品采集、样品运送 2.样品处理：集菌、减少杂菌、生物过滤、修复培养 3.增加样品接种量 4.挑选多个可疑菌落鉴定 5.增加分离平板的种类 6.选择合适的分离培养方法 7.选用敏感的、特异的鉴定方法 提高检出率的方法 8.培养基的质量控制 9.用阳性、阴性菌株与标本同步进行试验 10.物质储备，技术储备 11.责任心、事业心、荣誉感 12.团结合作、团队精神 13.“猎人的精神” 14.耐心、信心 15.计划、演习 临床相关知识： 所致疾病 感染量 症状 体症 潜伏期 病程 并发症 愈后 病死率 治疗原则 致病机制 分离培养 标本 增菌培养 流行病学： 传染源 传播途径 易感人群 季节分布 地区分布 年龄分布 性别分布 纯培养 鉴定、分型 确诊报告 培养特性 生化反应 生理特性 染色性 形态、排列 特殊结构 抗原结构 抵抗力、生态 生物学特性 实验室 生物安全 社 自 会 然 因 因 素 素 分 类 分子生物学 培养基对照：检查灭菌是否合格 培养基 + 试验菌 培养基 + 试验菌(灵敏度菌量) 制剂对照： 培养基 + 标本 + 试验菌 环境对照 无菌制剂的检查应设的对照？ 敬作抛砖之引， 以求美玉之来。 谢谢！ * * 所致疾病： 食物中毒 经6-24h潜伏期后发病 多发于夏秋季，病程较短，一般恢复较快 腹痛、腹泻，呕吐及发热，粪便为水样或糊状．少数有血水样便或粘液血便 * * 选用敏感的、特异的选择性平板或鉴别平板进行分离培养 免疫荧光菌球法 五、增加分离平板的种类 非军团菌 Legionella pneumophila (灰兰色可疑菌落) GVPC 平板　 李斯特氏菌显色培养基Listeria Chromagenic medium 用于李斯特菌的选择