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实验2 植物组织可溶性糖含量测定 蒽酮法测定P103-104 糖是光合作用的产物，与植物产品的品质密切相关；植物为了适应逆境条件，如干旱、低温，也会主动积累一些可溶性糖，降低渗透势和冰点，以适应外界环境条件的变化。糖类的种类繁多，其性质各不相同，因而测定方法也不同。 蒽酮比色法测定可溶性糖 苯酚法测定可溶性糖 3.5-二硝基水杨酸法测定还原糖 斐林试剂比色法测定还原糖 实验目的 熟悉可溶性总糖的测定方法 实验原理 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛。 实验原理 生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内,颜色深浅与糖含量成正比，故可用于糖的定量。 糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为625nm，故在此波长下进行比色 葸酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化，必须在反应后立即在同一时间内比色。 该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，包括：戊糖、已糖、寡糖类、多糖（淀粉、纤维素），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总糖，有特殊的应用价值。 特别注意 ◆样品中未溶解的残渣，如细胞壁中的纤维素、半纤维素也能被浓硫酸降解，而与蒽酮试剂发生反应，增加测定误差。 ◆不同糖类与蒽酮试剂的显色程度不同，次序为： 果糖?葡萄糖?半乳糖?甘露糖?戊糖， 所以不同材料会因不同糖类的比例不同而产生误差，但如是单一糖类，则误差可以避免。 器材与试剂 1. 实验仪器：分光光度计，恒温水浴，分析天平，烘箱，刻度试管，漏斗 2. 实验试剂：活性炭，乙醇，葡萄糖标准液，葸酮试剂（0.1%浓度，分析纯蒽酮1g，溶解于1000mL稀硫酸——760mL相对密度为1.84的浓硫酸用dH2O稀释成1000mL） 3. 实验材料：植物叶片 实验步骤 1．标准曲线的制作 3．显色测定： 4. 对照管：dH2O 1 mL，加 5 mL 蒽酮试剂，充分混匀，沸水浴中反应10分钟，取出，立即用水冷却至室温。 5．计算可溶性糖的含量(μg·mL-1) ： 依回归方程计算样品叶的糖浓度 A=0.0061C+0.0048 注意事项： 1.充分研磨、水浴提取 2.反应后要迅速冷却，操作一定要注意控制时间尽可能一致 3.反应混合液一定要混合均匀，反应温度一定要注意控制在100℃ 4.蒽酮试剂要注意避光保存。配置好的蒽酮试剂也应注意避光，当天配制好的当天使用。 5.试管要保证干燥清洁，无残留水滴。 6.比色测定要操作规范。 作业 1. 测定并计算实验材料的可溶性糖含量。 2. 分析影响实验结果的因素,并结合实验进行讨论。 3、应用葸酮法测得的糖包括那些类型？ 4、你知道还有哪些方法可以测定糖类？ * - 3H2O 浓硫酸 糠醛 羟甲基糠醛 戊糖 己糖 - 3H2O 浓硫酸 羟甲基糠醛 蒽酮 糠醛衍生物（绿色） 2．可溶性糖的提取： 过滤，得滤液进行测定 0.3g甘蓝叶 研磨成匀浆 dH2O冲洗转入三角瓶 加dH2O 80mL左右 冷却后滴加几滴醋酸铅 转入100mL容量瓶并定容 过滤于装有0.3g草酸钠的三角瓶 滤液1mL 加5mL蒽酮试剂 充分混匀 沸水浴中反应10分钟 取出，立即用水冷却至室温 625nm波长下比色测定 70-80℃水浴30 min W×106 CV ×100% C－回归方程求得糖量(μg·mL-1)； V－提取液量(100ml)； W－组织重量（g）。 可溶性糖含量（%）= * * *