06 实验6 植物抗逆性的测定（电导仪法） .pptVIP

实验6 植物抗逆性的测定 P207-209 实验目的 逆境--植物减产、品质下降、死亡。 掌握游离脯氨酸测定方法及电导率仪的使用。学会判断植物抗逆性的大小。 实验原理 1.植物在遭遇不良环境（如高温、低温等）时，原生质膜的选择透性丧失，透性增大，盐类或有机物从细胞中渗出，使环境溶液导电率升高。膜透性增大的程度与逆境胁迫强度有关，也与植物抗逆性的强弱有关。通过电导率的测量和糖的显色反应，可以测知物质的外渗，表明植物的受害情况。因此，电导法目前已成为作物抗性栽培、育种上鉴定植物抗逆性强弱的一个精确而实用的方法。 实验原理 2.植物遭受逆境时，常常主动积累脯氨酸，积累能力的强弱，与抗性直接相关。采用磺基水杨酸提取植物体内的游离脯氨酸，不仅大大减小了其他氨基酸的干扰，快速简便，而且不受样品状态（干或鲜样）限制。在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应生成稳定的红色络合物，用甲苯萃取后，在520nm处有最大吸收峰。 器材与试剂 1.实验仪器： 电导仪、抽气机、真空干燥器、分光光度计、天平、温箱、冰箱、水浴锅、烧杯、量筒、镊子、自动进样器、试管、 2.实验试剂： 脯氨酸标准溶液； 3%磺基水杨酸水溶液； 甲苯； 2.5%酸性茚三酮显色液（冰乙酸和6mol/L磷酸以3︰2混合，作为溶剂，4℃下2～3日有效）； 蒽酮试剂 3.实验材料：小麦幼苗等 实验步骤：一、电导率的测定 材料预处理：选取二叶期小麦幼苗若干，分二份，一份置40℃处理2h，另一份置室温做对照。 2. 每处理取20株长势相当的幼苗，用蒸馏水冲洗三次，并用洁净滤纸吸干，每苗取最上展开叶一片，并剪成长约1cm小段（三剪刀），放入大试管中，并用干净尼龙网压住（尼龙网用蒸馏水清洗三次，吸干），向试管中准确加入蒸馏水20ml，浸没叶片，测定初始导电率。 实验步骤：一、电导率的测定 3. 将材料放入真空干燥器，用抽气机抽气20min以抽出细胞间隙中的空气；重新缓缓放入空气，水即被压入组织中而使叶下沉，重复抽气一次。 5. 将抽过气的试管及材料取出，放在实验桌上静置20min，然后用洁净玻棒轻轻搅动叶片，在20～25℃恒温下，用电导仪测定溶液电导率，记录为处理电导率。 6. 测过电导率之后，再将试管连同材料放入100℃沸水浴中15min，以杀死植物组织，取出用自来水冷却10min，在20～25℃恒温下测其煮沸电导率。 注意事项 整个过程中，叶片接触的用具必须绝对洁净，也不要用手直接接触叶片，以免污染。 各处理和对照的待测液的体积要一样。 测定后电极要清洗干净。 实验步骤：二、脯氨酸含量测定 脯氨酸提取：取两个不同处理的小麦叶片0.5g左右，剪成1cm左右长，分别置于试管中，加入5ml 3%磺基水杨酸溶液，于沸水浴中浸提10min。 取出试管待冷却至室温后，吸取上清液2ml，加2ml冰乙酸和2ml显色液（酸性茚三酮），混匀后于沸水浴中加热30min。 冷却后，向反应试管中加4mL甲苯，振荡30s，静置分层。 取上层红色溶液至离心管，4000rpm离心5min。 用吸管吸取上层红色溶液，于520nm下比色。 对照为甲苯溶液。 注意事项 提取及显色要充分，提取过程中叶片漂浮时可用玻棒搅动。 甲苯与水不混容，比色过程中，严禁比色皿与水接触。润洗过程用滴管吸取甲苯进行。 甲苯需回收 实验结果计算 按下式计算伤害率 实验报告（作业） 1.试比较不同处理的叶片伤害率的变化情况，并加解释。 2.试比较不同处理的叶片脯氨酸含量的变化情况，并加解释。 3.分析影响实验结果的因素。 * 伤害率= 处理电导率-初始电导率 煮沸电导率-初始电导率 ×100% 按下述回归方程计算样品中脯氨酸的量 Pro（μg）=41.87×A520-0.0094 C—提取液中脯氨酸的量（μg） V—提取液总体积（5ml） a—测定时所吸取的体积（2ml） W—样品重（g） 脯氨酸含量测定实验结果： 常温 40℃ 脯氨酸含量 （μg·gFW-1） A 处理 实验结果计算 电导率测定实验结果： 常温 40℃ 伤害率 (100%) 煮沸电导率 （ms/cm） 处理电导率 （μs/cm） 初始电导率 （μs/cm） 处理 *