CLIC1通过ROS_ERK倌号通路参与宫颈癌SiHa细胞的迁移及侵袭.pdf

目 录 中文摘要 Ⅰ 英文摘要Ⅲ 常用缩写词中英文对照表 ⅤI 前 言1 1 材料与方法2 1.1 细胞来源2 1.2 实验仪器2 1.3 实验试剂3 1.4 实验方法4 1.5 统计学方法6 2 结 果7 2.1不同处理组细胞中CLIC1、p-ERK、MMP-2、MMP-9 蛋白的相对表达量 7 2.2 CLIC1通过ROS/EPK 信号通路调控宫颈癌SiHa细胞的迁移 10 2.3CLIC1通过ROS/EPK 信号通路调控宫颈癌SiHa细胞的侵袭11 2.4附图13 3 讨 论16 4 结 论19 参考文献20 综 述24 致 谢34 个人简历35 山西医科大学 （博）硕士学位论文 CLIC1通过ROS/ERK信号通路参与宫颈癌SiHa细胞的 迁移及侵袭 摘 要 目的： 宫颈癌是女性最常见的生殖系统恶性肿瘤，目前研究发现部分宫颈癌根治术后 的患者有发生转移及复发的可能，细胞内氯离子通道蛋1 （CLIC1）是一种目前研 究发现的跨膜蛋白，近期多项研究表明CLIC1在多种恶性肿瘤中表达升高，而且与 恶性肿瘤的转移密切相关。前期实验证明CLIC1 在缺氧-再加氧 （H-R）条件可通 过调控细胞内活性氧 （ROS）产生，从而参与宫颈癌的转移及其机制，本实验拟通 过研究 CLIC1通过ROS/ERK 信号通路参与宫颈癌SiHa 细胞的迁移及侵袭，从而 为宫颈癌的防治提供新的治疗靶点和治疗方案。 方法： 缺氧-再加氧 （H-R）培养人宫颈癌SiHa 细胞，分别用CLIC1特异性抑制剂 （IAA94）、ERK 抑制剂 （PD98059）、抗氧化剂 （NAC）或NADPH 氧化酶抑制 剂 （DPI）分别处理H-R 下宫颈癌SiHa 细胞，用Western-Blot 检测方法测定各组细 胞中CLIC1、基质金属蛋白酶2 （MMP-2）、基质金属蛋白酶9 （MMP-9）及磷酸 化细胞外信号调节激酶 （p-ERK）蛋白的相对表达量。细胞划痕实验、Transwell 细 胞侵袭实验分别检测对宫颈癌SiHa 细胞迁移及侵袭能力的影响，最终，利用统计 SPSS22.0软件进行分析。 结果： 1、用Western-Blot 方法检测得出H-R 组宫颈癌SiHa细胞中p-ERK 蛋白的相对 表达量 （6.60±0.04）显著高于常氧组 （1.00±0.02），H-R+DPI 组和H-R+NAC 组 I 山西医科大学 （博）硕士学位论文 细胞中p-ERK、MMP-2 及MMP-9 蛋白的相对表达量（2.83±0.02、1.86±0.01、3.59 ±0.03）明显低于H-R 组 （6.60±0.04、3.67±0.04、5.83±0.02）,H-R+IAA94 组和 H-R+PD98059 组细胞中p-ERK、MMP-2及MMP-9 蛋白的相对表达量（4.05±0.03、 2.67±0.02、3.48±0.03）明显低于H-R 组 （6.60±0.04、3.67±0.04、5.83±0.02）, 差异均具有统计学意义 （P0.01）。 2、细胞划痕实验检测出H-R 组宫颈癌SiHa细胞的划痕愈合面积（61.76±0.52） 明显高于常氧组 （41.93±0.68），H-R+DPI 组和H-R+NAC 组细胞的划痕愈合面积 （49.34±2.15、49.21±3.13）明显低于H-R 组 （61.76±0.52），H-R+IAA94 组和 H-R+PD98059 组细胞的划痕愈合面积 （50.53±3.18、49.90±6.28）也明显低于H-R 组 （61.76±0.5