【临床微生物实验】_分枝杆菌属检验.pptVIP

　直接涂片或浓缩集菌涂片，使涂片面积大约为2cm×1cm大小，然后进行金胺O荧光染色和抗酸染色。 （二）直接涂片检查 结核分枝杆菌金胺O染色，在荧光下菌体呈橘黄色 结核分枝杆菌痰涂片抗酸染色（×1000） 荧光染色（×450）结果报告 － 0 ／70视野 ± 1～2／70视野 ＋ 2～18／50视野 2＋ 4～36／10视野 3＋ 4～36／每个视野 4＋ 36／每个视野 抗酸染色（×1000）结果报告 － 　0／300视野 ± 　 1～2条／300视野 ＋ 1～9条/100视野 2＋ 1～9条/10视野 3＋ 1～9条/每个视野 4＋ 9/每个视野 （三）分离培养与鉴定 1. 标本前处理： 痰液标本的前处理： 标本加等量的4%NaOH 強力振荡混匀约 50 秒 室温静置 30 分钟 加等量无菌磷酸盐缓冲液中和 离心 3000g 约 15 分钟 倒掉上清液，加无菌磷酸盐缓冲液重悬 2. 分离培养　　 （1）传统培养方法 培养基：处理过的标本接种于Ｌ-Ｊ培养基 培养条件：含5%--10%CO2大气环境，最适生长温度35--37℃，黑暗高湿度环境培养6--8周。 （2）结核分枝杆菌的自动化快速培养系统 （四）分离培养与鉴定 3. 生物学鉴定 （1）初步鉴定：依据抗酸染色性、菌落特征、生长速度、色素产生等作出初步鉴定 （2）生化试验鉴定 烟酸累积试验（+）、硝酸盐还原（+） 触酶（+）、耐热触酶（-） 能被NAP抑制 不被T2H抑制、吡嗪酰胺酶（+） 结核分枝杆菌 （四）分离培养与鉴定 4. 免疫学鉴定 （1）结核菌素试验：迟发型超敏反应。 （2）结核分枝杆菌抗原检测 （3）抗PPDIgG检测 （四）分离培养与鉴定 结核菌素试验 纯蛋白衍生物(PPD)，是用三氯醋酸沉淀结核分枝杆菌培 养滤液后的纯化物。注入皮内后如受试者已感染结核， 则结核菌素与致敏淋巴细胞特异性结合，形成迟发型超 敏反应性炎症。 根据注射部位是否出现红肿判断结果 ＜10mm为阴性 ＞10mm为阳性 48小时后 （4）T-SPOT.TB检测 利用外周抗凝全血标本，通过检测结核感染后T淋巴细胞分泌的特异性细胞因子γ干扰素，来诊断是否存在结核感染。 5. 分子生物学鉴定　 各种PCR方法检测结核分枝杆菌DNA。6. 高效液相色谱（HPLC)分析鉴定 由于不同种的分枝杆菌细胞壁中的分枝菌酸不同，利用HPLC检测分枝菌酸可鉴定菌种。 （四）分离培养与鉴定 根据CLSI 文件M24-2A推荐： 结核分枝杆菌药敏试验选择的药物主要是抗结核一线药物如异烟肼、利福平、乙胺丁醇和比嗪酰胺等。 五、药敏试验的药物选择 第二节 非结核分枝杆菌（nontuberculosis mycobacteria,NTM） 本节主要内容 NTM的概述 临床上重要的NTM NTM的微生物学检验 NTM指结核分枝杆菌复合群和麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌，具有抗酸性，不是分类学上的名称。 广泛分布于水和土壤中。 条件致病，引起类似于结核分枝杆菌感染的慢性肺部疾病以及皮肤感染。 感染不会通过人与人之间进行传播。 概 述 1. 不产色菌 本群细菌在光照和暗处均不产生色素。 慢生长群 （1）鸟分枝杆菌复合群 （2）隐藏分枝杆菌 临床上重要的NTM 快生长群 （1）龟分枝杆菌-脓肿分枝杆菌群 （2）偶发分枝杆菌群 偶发分枝杆菌引起的注射后感染 脓肿分枝杆菌引 起的注射后感染 NTM感染后难于愈合的伤口 2. 光产色菌 均属慢生长菌，其特点是菌落在暗处为奶油色，曝光1h后变为黄色或橘黄色。 （1）堪萨斯分枝杆菌 （2）海分枝杆菌 临床上重要的NTM 3. 暗产色菌（慢生长群和快生长群） 这类细菌无论在有光或无光条件下均可产生色素，色素为黄色或橘黄色。与人类疾病有关的均是慢生长菌。 （1）戈登分枝杆菌 （2）瘰疬分枝杆菌 （3）苏加分枝杆菌 临床上重要的NTM 1.标本采集 与结核分枝杆菌类似 2. 涂片抗酸染色 NTM为抗酸杆菌，但较结核分枝杆菌短而粗，大小约1-8μm×0.3-0.5μm，抗酸染色着色均匀，呈束状或团状排列。 NTM的微生物学检验 NTM纯培养抗酸染色（×1000） 3. 分离培养与鉴