临床微生物学检验：分枝杆菌属检验.pptVIP

但标本涂片后进行革兰染色、瑞氏染色、抗酸染色均阴性 标本接种肉汤37℃培养2天，肉汤混浊。但转种BAP/MAC/CA分别于需氧和厌氧环境培养，都不生长。 肉汤涂片革兰染色：隐隐约约见到有形的细菌形态 肉汤继续培养5天后涂片革兰染色：看见明显细菌，且有分枝状，但因为BAP、MAC、CA培养阴性，不敢确认细菌 与临床沟通，了解到患者的情况：患者局部脓肿反复发作，常用抗生素治疗无效，疾病发生于局部肌肉注射后，局部针眼形成溃疡孔，已有近3个月的病史。 遂将标本接种于罗氏培养基 培养15天后可见到小菌落，上图是培养19天的结果 罗氏培养基上的菌落抗酸染色结果 该菌接种到血平板上培养半个月后开始有菌生长，继续培养长出有皱褶的淡黄色菌落，经抗酸染色为阳性，其形态更接近液体增菌培养基里的细菌形态，由于抗酸菌难着色，所以革兰染色染成了阴性的。 血平板培养15天后菌落涂片抗酸染色结果 结合生化鉴定，最后确定为： 溃疡分枝杆菌 * * 结核病是一种由结核杆菌感染引起的慢性传染病。结核杆菌可能侵入到人体的各个器官，但以肺结核最常见。 结核病是伴随人类历史最长的疾病之一，也是单一致病菌引致死亡最多的疾病。1904年在德国海德堡附近出土的新石器时代(公元前5000-10000年)人的颈椎骨化石，就发现有结核病变的存在。我国在公元前13～14世纪即有结核病的记载；马王堆出土的西汉女尸，尸体解剖时也发现其曾患有肺结核。18世纪，由于工业革命的兴起，欧洲大量农村人口涌入城市，居住拥挤，卫生环境差，再加上工作劳累，结核病开始在欧洲蔓延猖獗，发病人数大为增加。当时还没有办法治疗结核病，医生面对病人束手无策，大批病人死亡，英国伦敦的结核病死率达到900/10万。 在19世纪的小说和戏剧中描写肺结核病常常写道：“面色苍白、身体消瘦、一阵阵撕心裂肺的咳嗽……”由于结核病人大多面色苍白，也为了和当时的另一个人类的杀手“黑色瘟疫”——黑死病区分开，人们把结核病称为“白色瘟疫”。我国则把结核病称为“痨病”，肺结核称为“肺痨”。“十痨九死”是我国当时广为流传用来形容肺结核病人悲惨结局的俗语。 * （三）分离培养与鉴定 1. 标本前处理： 痰液标本的前处理： 标本加等量的4%NaOH 強力振荡混匀约 50 秒 室温静置 30 分钟 加等量无菌磷酸盐缓冲液中和 离心 3000g 约 15 分钟 倒掉上清液，加无菌磷酸盐缓冲液重悬 2. 分离培养　　 （1）传统培养方法 培养基：处理过的标本接种于Ｌ-Ｊ培养基 培养条件：含5%--10%CO2大气环境，最适生长温度35--37℃，黑暗高湿度环境培养6--8周。 （2）结核分枝杆菌的自动化快速培养系统 （四）分离培养与鉴定 3. 生物学鉴定 （1）初步鉴定：依据抗酸染色性、菌落特征、生长速度、色素产生等作出初步鉴定 （2）生化试验鉴定 烟酸累积试验（+）、硝酸盐还原（+） 触酶（+）、耐热触酶（-） 能被NAP抑制 不被T2H抑制、吡嗪酰胺酶（+） 结核分枝杆菌 （四）分离培养与鉴定 4. 免疫学鉴定 （1）结核菌素试验：迟发型超敏反应。 （2）结核分枝杆菌抗原检测 （3）抗PPDIgG检测 （四）分离培养与鉴定 结核菌素试验 纯蛋白衍生物(PPD)，是用三氯醋酸沉淀结核分枝杆菌培 养滤液后的纯化物。注入皮内后如受试者已感染结核， 则结核菌素与致敏淋巴细胞特异性结合，形成迟发型超 敏反应性炎症。 根据注射部位是否出现红肿判断结果 ＜10mm为阴性 ＞10mm为阳性 48小时后 （4）T-SPOT.TB检测 利用外周抗凝全血标本，通过检测结核感染后T淋巴细胞分泌的特异性细胞因子γ干扰素，来诊断是否存在结核感染。 5. 分子生物学鉴定　 各种PCR方法检测结核分枝杆菌DNA。6. 高效液相色谱（HPLC)分析鉴定 由于不同种的分枝杆菌细胞壁中的分枝菌酸不同，利用HPLC检测分枝菌酸可鉴定菌种。 （四）分离培养与鉴定 根据CLSI 文件M24-2A推荐： 结核分枝杆菌药敏试验选择的药物主要是抗结核一线药物如异烟肼、利福平、乙胺丁醇和比嗪酰胺等。 五、药敏试验的药物选择 第二节 非结核分枝杆菌（nontuberculosis mycobacteria,NTM） 本节主要内容 NTM的概述 临床上重要的NTM NTM的微生物学检验 NTM指结核分枝杆菌复合群和麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌，具有抗酸性，不是分类学上的名称。 广泛分布于水和土壤中。 条件致病，引起类