临床微生物学检验：实验1.pptVIP

原理 细菌的芽胞具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽胞不着色（芽孢呈无色透明状）。用着色力强的染料，并加热，以促进芽孢着色。脱色时，芽孢染上的颜色难以脱掉，而菌体会脱色。经复染后，菌体和芽孢呈现出不同的颜色。 芽胞染色（苯酚复红法） 方法： 1.初染：苯酚复红液，微加热5min, 水洗 2.脱色：95%乙醇 脱色2min，水洗 3.复染：亚甲蓝液 2-3min, 水洗 注意事项： 微加热，不可煮沸。 芽孢 spore 第三天实验内容 1.细菌生长现象观察： 血平、肉汤、半固体、斜面 2.不染色标本动力观察：变形、金葡 （压滴法，每人做） 3.芽胞染色（苯酚复红染色法--每人做） 思考题 如何判定所染的革兰染色结果准确？ 微生物“无菌操作”的内涵？ 谢谢！  第二天实验 培养基配制（二） 细菌分离培养接种 荚膜染色 目的要求： 1.掌握倾注培养法细菌菌落计数方法及注意 事项。 2.掌握平板、液体、半固体及斜面等各 种培养基的配制及接种方法。 3.熟悉荚膜染色原理和方法。 昨天实验结果观察 注意事项 1）平板有较大片状菌落时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板计数菌落数。 2）若片状菌落不足平板一半，而其余一半中菌落数分布均匀，则计数后乘2代表全平板菌落数，然后再求该稀释度的平均菌落数 细菌计数观察及注意事项 可以进行计数的平板 细菌计数 不同稀释度菌落数的确认： 1）菌落数在30~300之间： ①若两个稀释度实际菌落数的比值＜2，报告两个稀释度的平均菌落数，如例2；若比值≥2，则以两个稀释度中较大菌落数乘以稀释倍数报告之，如例3、例4。 ②当只有一个稀释度的菌落数在30~300之间时，即以该菌落数乘以稀释倍数报告之，如例1。 2）所有稀释度菌落数均大于300：则应按最高稀释度菌落数乘以稀释倍数报告之，如例5。 3）所有稀释度菌落数均小于30：则应按最低稀释度的菌落数乘以稀释倍数报告之，如例6。 4）若所有稀释度均不在30~300之间：则以最接近30或300的菌落数乘以稀释倍数报告之，如例7。 5）所有稀释度均未见菌落：则报告小于10，而不报告0。如例8。 例子 不同稀释度的平均菌落数 相邻稀释度菌落数在 菌落总数 报告方式 30-300间的比值 （CFU/ml） （CFU/ml） ? 10-1 10-2 10-3 ? 1 1365 164 20 _ 16400 1.6×104 2 2760 295 46 1.6 37750 3.8×104 3 2890 271 60 2.2 27100 2.7×104 4 150 30 8 2.0 1500 1.5×103 5 无法计数 4650 513 _ 513000 5.1×105 6 27 11 5 _ 270 2.7×102 7 无法计数 305 12 _ 30500 3.1×104 8 0 0 0 　 _ 1×10 10 表1 稀释度选择及菌落数报告方式 细菌计数 菌落数报告方式： 1）菌落数100时按实数报告。 2）菌落数100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以四舍五入法计算，也用10的指数表示，如2.5×103。 3）在报告菌落数为“无法计数”时，应注明待检标本的稀释倍数。 器材和试剂 1.培养基： 营养肉汤，半固体， 营养琼脂 2.菌种： 葡萄球菌 、大肠埃希、链球菌 、变形杆菌、铜绿假单胞菌 肺炎链球菌　肺炎克雷伯菌　 3.其它： 接种针或接种环、酒