2020第三章 细胞工程实验室配置及基本技术.pptVIP

第三章 细胞工程实验室配置及基本技术 § 1 实验设置 § 2 基本技术要求－无菌环境与无菌操作 § 3 培养条件 § 4 离体培养的营养需求 § 1 实验室设置 细胞工程实验室必须满足三个基本的需要： ? 实验准备，包括培养基配制，洗涤与灭菌等； ? 无菌操作； ? 控制培养。 § 1. 实验室设置 一 . 实验室组成 1 ．基本实验室 准备室 准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。要求 宽敞明亮，通风条件好。 接种室 接种室的功能是进行无菌操作。要求封闭性好，干燥清洁， 能较长时间保持无菌。为了保持清洁，接种室应防止空气对流。 培养室 培养室的功能是对离体材料进行控制培养。其首要要求是 要能控制光照和温度，其次为防止微生物感染，培养室应保持干燥 和清洁。 § 1. 实验室设置 一 . 实验室组成 2 ．辅助实验室 细胞学实验室 其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求 清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。 摄影室及暗室 其功能是进行培养材料的摄影记录和胶片冲印。在有 条件的情况下可建立此实验室。 生化分析室 在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应 的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。 § 1. 实验室设置 一 . 实验室组成 Culture room Preparation room sterilizing Sterile operation Cytology room Transiti on area 实验室布局示意图 § 2. 实验室设置 二 . 基本设备配置 基本设备 冰箱、天平、酸度计、、纯水器、电炉、培养基分装器、 搅拌器。 灭菌设备 蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾 消毒器、紫外灯。 无菌操作设备 净化工作台、接种箱。 光温控制设备 时间程序控制器、空调及温度感应器。 细胞培养设备 培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、 摇床、 生物反应器等。 细胞学鉴定设备 光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜。 § 2. 实验室设置 二 . 基本设备配置 灭菌设备 § 2. 实验室设置 二 . 基本设备配置 无菌操作设备 § 2. 实验室设置 二 . 基本设备配置 光 照 培 养 及 控 制 设 备 § 2. 实验室设置 二 . 基本设备配置 § 2. 实验室设置 二 . 基本设备配置 § 2. 基本技术 一 . 洗涤技术 ? 洗涤液： 弱 用重铬酸钾 50g 加入蒸馏水 1L ，加热溶化，冷却后 再缓慢加入浓硫酸 90ml 。 中 用重铬酸钾 50g 加入蒸馏水 100ml ，加热溶化，冷 却后再缓慢加入浓硫酸 875ml 。 强 与浓硫酸加热的同时缓慢加入磨碎的重铬酸钾，直 到重铬酸钾达到饱和为止。一般浓硫酸 1L 加入重铬酸钾 50g 。 § 2. 基本技术 一 . 洗涤技术 ? 洗涤方法 玻璃器皿洗涤 新的玻璃器皿 已使用过的试管、烧杯、三角瓶 吸管、滴管等内径狭小的玻璃制品 塑料用品洗涤 一般用合成洗涤剂洗涤，因其附着力较 强，因此冲洗时必须反复多次，最后用 蒸馏水冲洗。 金属用品洗涤 金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤， 需要清洗时，一般用酒精擦洗，然后火 焰干燥。 § 2. 基本技术 二 . 灭菌、消毒 物理方法： 物理灭菌 干热、湿热、射线处理 、 过滤、 离心沉淀等 化学方法： 消毒剂、抗菌素灭菌 外植体灭菌技术： 对外植体伤害小，灭菌效 果好 § 2. 基本技术 二 . 灭菌、消毒 培养基： 湿热灭菌，即高压高温蒸汽灭菌 . 玻璃器皿： 湿热灭菌或干热灭菌，即在烘箱中加热