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重点知识:
动物细胞工程
?1. 动物细胞培养 指明“动物”细胞培养
(1)概念:动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和繁殖。
原理:细胞增殖
(2)动物细胞培养:
①取动物组织块(动物胚胎或幼龄动物的器官或组织)
②机械消化或用胰蛋白酶处理分散成单个细胞(利于细胞与培养液充分接触,进而吸收氧气和营养物质并排出废物)
③制成细胞悬液→转入细胞培养瓶/卡式瓶中进行原代培养
——细胞间相互依存,呈现一定程度的组织特性,保持生长分裂、接触抑制、衰老死亡
④贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理使贴壁细胞从瓶壁上脱落下来并分散成单个细胞稀释分装传代培养(最初的若干次传代也归入原代培养)
——大多数细胞最终衰老、凋亡(①营养物质耗尽②遗传物质没变,衰老凋亡)
动物组织培养:动物组织在体外及人工条件下维持生活状态或生长特性
——可伴随组织分化,但主要的生命活动仍以细胞为单位;由于细胞运动变化,?????????培养物组分发生变异,长期培养最终成为简单的细胞培养
(3)细胞贴壁和接触抑制
(4)动物细胞培养条件(液体培养基)
①无菌无毒:培养液和用具无菌处理,一定量的抗生素(种、量),定期更换培养液
②营养:水无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素、动物(胎牛)血清、滋养细胞、激素Cf天然(血清)和人工配制成分
③适宜渗透压、温度、pH(CO2培养箱:维持适宜的pH值7.2~7.4)
提高形成率的措施:
①选择适宜的培养基和CO2、pH?
②胰岛素等激素刺激
③添加血清
④滋养细胞支持生长(经射线照射本身失去增殖力的小鼠成纤维细胞)
(5)细胞系:可连续传代的细胞(首次传代细胞即成为细胞系)
①连续细胞系 e.g异倍体 恶性(致癌)/不死性(保留接触抑制,不致癌)
②有限细胞系 e.g二倍体细胞
——传代培养的原因:
①细胞密度过大
②代谢消耗引起营养枯竭
细胞株:特殊的细胞系
(6)细胞克隆/克隆培养法:
定义:把一个单细胞从群体中分离出来单独培养,使之繁衍成一个新的细胞群体
特点:细胞群体来自于同一个细胞(否则具有异质性),遗传性状均一,表达性状相似
要求:
①最基本:分离出来的细胞是一个而非多个
②一般选择连续细胞系:对培养环境有较大适应范围并具有较强独立生存能力
用途:从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系
2.动物体细胞核移植技术和克隆动物
动物难以克隆的根本原因:
细胞分化过程中细胞质中的调节蛋白关闭了核中与个体发育有关的基因,使基因选择性表达,基因组中基因活动不完全
(1)原理:动物细胞核的全能性
(2)供核细胞:优良动物的传代培养10代以内的细胞
——后代性别由核供体动物个体的性别决定
受体细胞:去核的MII中期的卵母细胞
①细胞较大,容易操作
②细胞质营养丰富,具有调控细胞核发育、促进核基因表达的物质
(3)体细胞核移植的大致过程是:显微操作去核法
——多莉羊的成功说明:
①高度分化细胞经过一定技术处理,也可以回复到类似受精卵时期的功能
②在胚胎和个体发育中,细胞质具有调控细胞核发育的作用
——无法培育出性状完全相同的克隆动物的原因:
①受体细胞的细胞质基因控制性状表达
②细胞分裂中基因突变
③环境因素
3.动物细胞融合
精品课件:
教案:
1.???教学目标?1.知识与技能:简述哺乳动物精子和卵子的发生及哺乳动物的受精过程2.过程与方法:简述哺乳动物的胚胎发育过程及主要特点3.情感态度与价值观:认同胚胎工程建立及发展的意义2.???教学重点/难点?【教学重点】哺乳动物精子和卵子的发生。哺乳动物的受精过程。哺乳动物的胚胎发育。【教学难点】哺乳动物受精过程中精子的获能、顶体反应、透明带反应、卵黄膜封闭作用的概念和生理功能。哺乳动物胚胎发育各阶段的主要特点。3.???教学用具?4.???标签?????教学过程?【导入】通常情况下一只母羊一胎一胎只生1-2只羔羊,畜牧业生产上需要快速增加高产肉羊和奶羊的数量,现在可用生物工程技术之一的胚胎工程来实现这一目标。一、胚胎工程胚胎工程指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术,如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。经过处理后获得的胚胎,还需要移植到雌性动物体内生产后代,以满足人类大各种需求。操作对象:早期胚胎和配子技术手段:胚胎移植、体外受精、??胚胎分割、胚胎干细胞培养等理论基础:哺乳动物的受精卵和早期胚胎的发育规律二、精子和卵子的发生1.精子的发生(1)场所:精子的发生是在睾丸内完成的。(2)时期:从初情期开始直到生殖机能衰退。(3)过程:发生的过程大体可分三个阶段。第一阶段:初级精母细胞的形成:精原细胞经过有丝分裂产生多个初级精母细胞第二阶段:精细胞的形
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