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基 因 工 程 生物工程专业核心课程 授课教师 : 李京京 Genetic Engineering 1. 基因工程概述 2. 基因工程的基础知识与基本技术 3. 基因工程所需基本条件 4. 基因工程的操作过程 5. 目的基因的获取 6. 克隆基因的表达 7. 转基因生物技术 一、基因工程概述 1 基因工程的基本概念 2 基因工程的诞生 3 基因工程的研究内容 4 基因工程的应用 5 基因工程的安全性 A 重组 DNA 技术的基本定义 ? 重组 DNA 技术 是指将一种生物体（ 供体 ）的基 因与 载体 在体外进行拼接重组，然后转入另一种 生物体（ 受体 ）内，使之按照人们的意愿稳定遗 传并表达出新产物或新性状的 DNA 体外操作程序， 也称为 分子克隆技术 。 ? 因此， 供体、受体、载体 是重组 DNA 技术 的 三 大基本元件。 1 基因工程的基本概念 B 基因工程的基本定义 基因工程 是指重组 DNA 技术的产业化设 计与应用，包括 上游技术 和 下游技术 两大 组成部分。 上游技术 指的是基因重组、克 隆和表达的设计与构建（即重组 DNA 技 术）；而 下游技术 则涉及到基因工程菌或 细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯 化过程。 2 基因工程的诞生 A 基因工程诞生的理论基础 1 ) DNA 是遗传物质 ? 肺炎双球菌转化实验 , 1944 年 Avery ，确定 了基因的分子载体是 DNA ，而不是蛋白质。 ? 噬菌体转染实验 , 1952 年 Alfred Hershy 和 Marsha Chase 进一步证明遗传物质是 DNA 。 2) DNA 双螺旋结构 1953 年 James D. Watson 和 Francis H. C. Crick 揭示了 DNA 分子的 双螺旋结构 和 半保留复制机制。 3 ) 中心法则和遗传密码 1957 年 Crick 又提出了遗传信息传递的 “ 中心法则 ” DNA RNA protein 1964 年 Marshall Nirenberg 和 Gobind Khorana 等终于 破译了 64 个遗传密码 B 基因工程诞生的技术突破 1 ) 限制性内切酶（ restriction enzymes ） 1970 年 H.O. Smith 等分离出第一种限制 性核酸内切酶。 Werner Arber 理论预见限制酶 Hamilton O. Smith 得到第一个限制酶 Daniel Nathans 用限制酶切得 SV40 DNA 片断 2 ) DNA 连接酶（ ligase ） 1967 年 5 个实验室几乎同时发现了 DNA 连接酶。 3 ) 载体（ vector ） 1972 年前后使用小分子量的细菌 质粒 和 ? 噬菌 体 作载体。在细菌细胞里的大量扩增。 4 ) 感受态体系 1970 年 M. Mandel 和 A. Higa 发现经过 氯化钙 处理的大肠杆菌容易吸收噬菌体 DNA 。 1972 年 S. Cohen 发现这种处理过的细菌同样能吸收 质粒 DNA 。 5 ） 逆转录酶 1970 年 Baltimore 等人和 Temin 等人同时各自发 现了逆转录酶。 6 ） 琼脂糖凝胶电泳 1960s 发明了琼脂糖凝胶电泳，可将不同长度 的 DNA 分离开。 7 ） DNA 测序技术 1975 年 F. Sanger 、 A. Maxam 和 W. Gilbert 发明 了 DNA 快速测序技术。 C 基因工程的诞生 1 ） Berg 的开创性实验 1972 年斯坦福大学的 Paul Berg 小组完成 了首次体外重组实验： 将 SV40 的 DNA 片断与 ? 噬菌体的 DNA 片断连接起来。 2 ） Boyer-Cohen 实验 1973 年斯坦福大学的 S. Cohen 小组将含有 卡那 霉素抗性 基因的大肠杆菌 R6-5 质粒与含有 四环 素抗性 基因的另一种大肠杆菌质粒 pSC101 连接 成重组质粒，具有 双重抗药性 。 后来又把非洲爪蟾核糖体基因片断同 pSC101 质粒重组，转化大肠杆菌，并在菌体内成功 转录出相应的 mRNA 。这是第一次成功的基因 克隆实验。 Boyer- Cohen 实验 3 基因工程的研究内容 1 ） 目的基因的获取 从复杂的生