棉花盐胁迫响应基因GhMYB73和GhSCL4的功能验证.pdfVIP

棉花盐胁迫响应基因GhMYB73 和GhSCL4 的功能验证 目录 摘要 i Abstract iii 缩略词表 vi 第一章 文献综述 1 1.1 棉花概述 1 1.2 土壤盐渍化对农业的挑战 2 1.3 植物响应盐胁迫的生理变化和分子机制 3 1.3.1 有机渗透调节机制 3 1.3.2 盐胁迫环境下的离子平衡调节机制 4 1.4 盐胁迫应答调控网络 6 1.4.1 ABA 信号途径 6 2+ 1.4.2 Ca 介导的信号转导途径 8 1.4.3 NO 介导的信号转导途径 10 1.5 植物耐盐基因 12 1.5.1 MYB 类转录因子 12 1.5.2 GRAS 转录因子 14 1.6 本研究的目的和意义 16 第二章 GhMYB73 在盐胁迫响应中功能鉴定及调控机制研究 17 2.1 实验材料和设备 17 2.1.1 植物材料 17 2.1.2 生物工程载体 17 2.1.3 实验设备 17 2.2 实验方法 17 2.2.1 大肠杆菌(E. coli)扩繁目的DNA 序列 17 2.2.2 农杆菌感受态细胞的转化 18 2.2.3 棉花的遗传转化 18 2.2.4 拟南芥培养 19 2.2.5 棉花种植及盐、ABA 处理取样 20 I 华中农业大学2020 届博士研究生学位论文 2.2.6 荧光定量PCR 20 2.2.7 序列比对分析21 2.2.8 转录因子转录活性分析21 2.2.9 亚细胞定位实验23 2.2.10 转基因拟南芥的获得24 2.2.11 不同胁迫处理下萌发率、子叶展开率和主根长度统计26 2.2.12 拟南芥苗期盐胁迫表型观察27 2.2.13 脯氨酸含量测定27 2.2.14 酵母双杂实验（Yeast 2 hybridization ）27 2.2.15 双分子荧光互补（BiFC ）28 2.2.16 棉花GhMYB73 基因的VIGS 实验29 2.2.17 台盼蓝染色30 2.3 结果与分析30 2.3.1 GhMYB73 是一个受NaCl 和ABA 诱导上调表达的基因30 2.3.2 GhMYB73 进化分析和序列比对31 2.3.3 GhMYB73 亚细胞定位和转录活性分析32 2.3.4 GhMYB73 在拟南芥中功能验证33 2.3.5 GhMYB73 在棉花中的功能验证38 2.3.6 GhMYB73 和ABA 受体GhPYL8 相互作用41 2.3.7 GhPYL8 在植物响应盐胁迫过程中功能分析42 2.4 讨论44 2.4.1 GhMYB73 是植物响应盐胁迫过程的一个正调控因子44 2.4.2 GhMYB73 增强植株对渗透胁迫的耐受性45 2.4.3 GhMYB73