水稻抗白叶枯病主效基因Xa14的克隆与功能分析.pdfVIP

水稻抗白叶枯病主效基因Xa14 的克隆与功能分析 目 录 中文摘要 i ABSTRACT iii 缩略语表 v 1 前言 1 1.1 水稻白叶枯病 1 1.2 植物的先天免疫系统 1 1.2.1 PTI 2 1.2.2 ETI 2 1.2.3 PTI 和ETI 的关系 4 1.3 水稻抗白叶枯病主效基因的研究进展 5 1.4 NLRs 抗病基因的结构与功能 12 1.5 NLRs 抗病基因的进化 14 1.6 水稻抗病等位基因的研究 15 1.7 稻属的组成和进化 15 1.8 研究目的与意义 19 2 材料与方法 20 2.1 水稻材料和主要菌株 20 2.2 病原菌的培养、接种、调查及分析 20 2.2.1 病原菌的培养、接种及调查 20 2.2.2 细菌生长曲线分析 21 2.3 载体构建 21 2.3.1 功能互补遗传载体的构建 21 2.3.2 酵母双杂交载体的构建 22 2.3.3 双分子荧光互补载体的构建 22 2.3.4 免疫共沉淀载体的构建 23 I 华中农业大学2020 届博士研究生学位论文 2.4 核酸操作及基因分析26 2.4.1 DNA 抽提及SSR 分析26 2.4.2 高质量DNA 抽提及Southern 杂交分析27 2.4.3 水稻叶片总RNA 抽提28 2.4.4 RNA 反转录和基因表达检测28 2.5 蛋白质互作分析29 2.5.1 酵母双杂交实验29 2.5.2 BiFC 实验30 2.5.3 Western blot 实验30 2.5.4 免疫共沉淀实验31 2.6 RGAF 同源蛋白的进化分析32 2.7 水稻种质资源中等位基因分析32 3 结果与分析33 3.1 Xa14 的克隆与功能分析33 3.1.1 Xa14 的精细定位33 3.1.2 Xa14 候选基因的鉴定34 3.1.3 候选基因RGAf-BB14 的功能验证36 3.1.4 转基因植株的共分离分析38 3.1.5 Xa14 抑制白叶枯病菌的生长繁殖40 3.1.6 Xa14 基因不受病原菌诱导表达41 3.1.7 Xa14 基因的拷贝数分析42 3.2 Xa 1-2 的克隆与功能分析43 3.2.1 候选基因的序列分析43 3.2.2 RGAf-BB2 基因增强水稻对白叶枯病菌的抗性44 3.2.3 Xa1 的功能验证48 3.2.4 Xa1 、Xa1 -2 和Xa14 基因的抗谱比较51 3.3 Xa1 、Xa1 -2 和Xa14 基因的遗传关系53 3.3.1 Xa1 减弱Xa14 介导的抗病功能53 II 水稻抗白叶枯病主效基因Xa14 的克隆与功能分析 3.3.2 Xa1 不影响Xa14 的表达量 57 3.3.3 Xa1 -2 也减弱Xa14 介导的抗病功能 58 3.4 XA1 、XA1-2 和XA14 蛋白的功能分析 60 3.4.1 XA1、XA1-2 和XA14 蛋白的序列分析 60 3.4.2 XA1 和XA14 蛋白在酵母中的互作关系 61 3.4.3 BiFC 验证XA1-BED 和XA14-BED 蛋白互作 63 3.