脑脊液标本细菌学检验标准操作规程.docxVIP

脑脊液标本细菌学检验标准操作规程 1.目的 规范脑脊液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验 结果准确可靠。 2.适用范围 脑脊液培养。 3.标本 3.1 标本类型 脑脊液。 3.2 标本采集 由临床医师以无菌要求做腰椎穿刺，抽 取脑脊液 2-3ml ，盛于无菌容器中送检。脑膜炎奈瑟菌离体 后能产生自溶酶，迅速自溶，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌离 体后也易于死亡。因此，脑脊液无论涂片或培养，必须于采 集后立即送检。 3.3 标本拒收标准 3.3.1 标本标识与化验申请单不符。 3.3.2 标本未用无菌试管留取。 3.4 标本保存  采集标本后立即送到实验室，  不能及时 送检可置于室温，放置时间不应超过  2 小时，切勿放冰箱， 否则影响检出率。 试剂、仪器 4.1 革兰染液、氧化酶试剂、 3%触酶、血琼脂平板、巧 克力平板、麦克凯平板、相关生化试剂等。 4.2 VITEK  鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（  GNI+  ）、革 兰阴性菌药敏卡（  GNS ）、革兰阳性菌鉴定卡（  GPI）、革兰 阳性菌药敏卡（ GPS）、药敏纸片、 TBA 板条等，有效期及 储存条件参见试剂说明书。 4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、 CO2 培养箱等。 细菌鉴定和药敏质控参见《质量管理程序》 检验步骤 接收标本后，立即对标本进行编号、登记。 6.1 涂片检查 6.1.1 一般细菌涂片检查  外观浑浊或脓性脑脊液可直 接涂片，无色、透明的脑脊液，应  3000r/min  离心  10-15  分 钟后取沉淀物涂片、革兰染色、就、镜检。根据染色及形态 特征，常可初步提示细菌的种类。 6.1.2 结核分枝杆菌涂片检查 参见《分支杆菌属检验 标准操作规程》 6.1.3 新生隐球菌涂片检查 取脑脊液的沉淀物作墨汁 负染色，或取脑脊液的离心沉淀物接种于沙氏培养基，置于 35 摄氏度培养 2~5 日，根据菌落特性， 涂片染色镜检作出报 告。必要时可作生化反应进一步鉴定。 6.2 分离培养 6.2.1 用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物， 分别接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯平板，置 于 5%~10%CO2 环境中 35 摄氏度培养 18~24 小时，观察细菌生长情况，根据菌落特点、形态与染色及生化反应鉴定细 菌，并作药敏试验。 6.2.2 结核分枝杆菌培养 参见《分支杆菌属检验标准操 作规程》 7.结果报告 无论是涂片还是培养，一旦检测到阳性细菌应立即电话 或书面通知临床医师。查见细菌，报告菌名和药敏结果。经 培养 48 小时，仍无细菌生长者，报告“培养 2 日无细菌生 长”。 8.注意事项 8.1 抽取的脑脊液分置于无菌试管中， 迅速送至实验室， 病毒、真菌分支杆菌培养样本置于 4° C 保存待送。 8.2 流感嗜血杆菌容易在外界环境中死亡，脑膜炎奈瑟 菌对寒冷和干燥均很敏感，在体外容易自溶，故不论是涂片 镜检还是进行培养，均应及时送检。 临床意义 正常人的脑脊液是无菌的，检出细菌提示细菌性（急性 化脓性或结核性等）脑膜炎。化脓性脑膜炎最多见脑膜炎奈 瑟菌，肺炎链球菌居第二位。 3 个月至 5 岁儿童细菌性脑膜 炎的主要致病菌是流感嗜血杆菌，新生儿脑炎多由大肠埃希 菌、 B 群溶血性链球菌和脑膜败血黄杆菌引起的，特别是早 产的婴儿。结核分枝杆菌引起结核性脑膜炎。 85%脑脓肿病 人脑脊液培养可检出厌氧菌，有时可为厌氧菌和需氧菌混合 感染。 危急值报告 直接涂片找到细菌或培养阳性均作危急值报告。若检测 出脑膜炎奈瑟菌则应做传染病报告。 参 考 文 献 中国合格评定国家认可委员会 .CNAS-CL32:2008 医 学实验室质量和能力认可准则在微生物学检验领域的指南.2008 周庭银编著 . 临床微生物学诊断与图解 . 第二版 . 上海：上海科学技术出版社， 2007 叶应妩，王毓三，申子瑜主编全 . 国临床检验操作规程第 . 三版 . 南京：东南大学出版社， 2006 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy.9th ed.Washington ：ASM Press， 2007 [5]ISO15189:2007 医 学 实 验 室 - 质 量 和 能 力 认 可 准 则.2007 编写人： AAA 、 BBB 操作人：本室操作人员 批准人：