【国自然】人多能干细胞向胰腺β细胞和神经细胞定向分化的机制研究.docxVIP

项目名称： 人多精干细胞向胰腺β细胞和神经细胞定向分解的机制研讨 首席科学家： 邓宏魁 北京大学 起止年限： 2012.1至2016.8 依托部分： 教育部 一、要害科学问题及研讨内容 （一） 要害科学问题 现在人多精干细胞定向分解没有在“功用老练”和“分解功率”两个难点上取得打破。依据咱们分道扬镳树立的安稳体外分解系统，咱们以为处理这两个问题的一个要害点在于对分解进程中的干/祖细胞的特化、构成阶段和终末功用细胞老练阶段的分子调控网络展开系统性研讨。干/祖细胞具有扩增并能进一步分解为老练功用细胞的才能，了解干/祖细胞的产生机制，并扩增和富集干/祖细胞，然后进步分解功率，将为下一步研讨终末分解细胞的老练机制打下重要根底。终末功用细胞老练阶段则直接关系到终末细胞的功用是否彻底。因而咱们以为需求在这两个阶段寻觅促进干/祖细胞特化、产生和扩增以及终末功用细胞老练的要害因子，并深化剖析其分子调控机理。 处理这两个问题的别的一个要害点在于剖析人体内胚胎期细胞分解和老练进程相对形式生物的独特性，为人多精干细胞体外分解供给新的头绪。体外定向分解系统的树立首要依据对体内胚胎期细胞分解和功用老练的调控机制的研讨，可是现在人多精干细胞定向分解首要参阅小鼠等形式生物的发育机制研讨，而依据这些形式生物的发育机制指导人多精干细胞定向分解存在很大的局限性：一方面种属差异造成人细胞分解和功用老练具有其独特性，另一方面人胚胎发育时程较其他形式生物更长，发育进程中人体细胞分解和功用老练的机制比其他形式生物更为杂乱。因而，要处理现在体外分解中一系列问题，需求深化研讨人体内胚胎期细胞分解和功用老练的进程，以及该进程比较其他形式生物的独特性。 综上所述，结合咱们团队在人多精干细胞向胰腺β细胞和神经细胞定向分解上的作业根底，本项目提出以下要害科学问题：1）体外分解系统中促进胰腺干/祖细胞和神经干/祖细胞特化、产生的要害因子是什么？这些要害因子是怎么被调控的？2）体外分解系统中促进胰腺β细胞产生和功用老练的要害因子是什么？这些要害因子是怎么被调控的？3）体外分解系统中终末神经元的生理功用是怎么取得的？4）人体内胚胎期胰腺β细胞及神经细胞的分解和功用老练进程相对形式生物有何独特性？怎么学习这种独特性来为人多精干细胞向胰腺β细胞及神经细胞定向分解寻觅新的头绪？ （二） 首要研讨内容 环绕上述要害科学问题，本项意图首要研讨包括四个方面： 1.人多精干细胞向胰腺β细胞定向分解的机制研讨 依据咱们已树立的安稳的人多精干细胞向胰腺β细胞定向分解系统，从mRNA、蛋白表达、表观遗传学等多个水平剖析现在体外分解系统中胰腺干/祖细胞、胰腺β细胞的基因调控网络，以剖析现在分解系统的要害缺点。依据这些头绪，进一步寻觅促进胰腺干/祖细胞构成的要害因子以及促进胰腺β细胞构成和功用老练的要害因子，然后说明这些要害因子的分子调控机制。此外，因为胰腺归于内胚层器官，其干祖细胞前期特化进程的要害调控信号通路与其他内胚层器官如肝脏、胸腺等比较必定有其特异性。咱们将系统比较在内胚层发育进程中，胰腺干/祖细胞前期命运决议的要害信号通路与其它内胚层安排细胞的异同，然后寻觅特异性调控胰腺干/祖细胞前期特化的要害因子和相关信号通路。 2.剖析人胰腺β细胞分解和功用老练途径的独特性 一方面，经过剖析人体内胚胎期从胰腺开端构成到胰腺β细胞功用老练的进程中不同阶段的胚胎胰腺样本，来系统地剖析描绘人体内胚胎期胰腺β细胞的分解和功用老练进程，为体外人多精干细胞向胰腺β细胞定向分解供给重要参阅；在此根底上，咱们还将系统剖析内胚层其他器官如肝脏等胚胎期的样本，寻觅其特化与发育的要害转录因子和信号通路，并比较其与胰腺安排特化的差异，然后剖析人胰腺细胞发育进程的独特性。 另一方面，在胰腺干/祖细胞构成阶段、胰腺β细胞老练阶段，从基因表达、表观遗传学等多个视点系统剖析胰腺发育进程中的要害调控基因的表达形式，并与形式生物胰腺发育进程相应基因的表达形式进行比较剖析，以提醒人体内胚胎期胰腺β细胞分解和功用老练进程的独特性。隔阂别离人体内胚胎期胰腺β细胞分解和老练进程中不同阶段的细胞，运用咱们已树立的分解细胞体内功用老练系统研讨人体内胰腺β细胞功用老练进程，并与形式生物β细胞功用老练进程比较，剖析其独特性。依据这些独特性，在体外分解系统中进一步寻觅促进胰腺β细胞分解和功用老练的要害因子，并研讨其调控机制。 3.人多精干细胞向神经细胞分解中前期特化分子机理的研讨 选用咱们近期树立的人多精干细胞向神经细胞前期分解的高效模型，运用转录组测序和甲基化DNA免疫共沉淀测序技能（MeDIP-seq）检测人多精干细胞向神经细胞前期分解进程中的时空明显改变基因和甲基化润饰改变图谱，剖析前期神经分解进程中的要害调控网络。隔阂，选用人类激酶基因组（kinome