组织培养的培养条件.docVIP

组织培养的培养条件 在植物组织培养中温度、光照、湿度等各种环境条件，培 养基组成、PH值、渗透压等各种化学环境条件都回影响组织 培养育苗的生长和发育。 、温度(temperature) 因为温度是植物组织培养中的重要因素，所以植物组织培 养在最适宜的温度下生长分化才能表现良好，大多数植物组 织培养都是在23?27°C之间进行，一般采用25±2°CO低于 15°C时培养，植物组织会表现生长停止，高于35°C时对植物 牛长不利。但是，不同植物培养的适温不同。白鹤非的最适 温度是20°C.月季是25?27°C、番茄是28°CO温度不仅影 响植物组织培养育苗的生长速度，也影响其分化增殖以及器 官建成等发育进程。如烟草芽的形成以28°C为最好，在12 °C以下，33°C以上形成率皆最低。 不同培养冃标采用的培养温度也不同，百合鳞片在30 °C以下再生的小鳞茎的发叶速度和百分率比在25%以下的 高。桃胚在2?5€条件进行一定时间的低温处理，有利于 提高胚培养成活率。用35°C处理草莓的茎尖分生组织3?5 d,可得到无病毒苗。 二、光照(light) 组织培养中光照也是重要的条件之一，主要表现在光 强、光质、以及光照时间方面： 1、 光照强度(light intensity) 光照强度对培养细胞的增殖和器官的分化有重要影响， 从目前的研究情况看，光照强度对外植物体、细胞的最初分 裂有明显的影响。一般来说，光照强度较强，幼苗生长的粗 壮，而光照强度较弱幼苗容易徒长。 2、 光质(light wave) 光质对愈伤组织诱导，培养组织的增殖以及器官的分化 都有明显的影响。如百合珠芽在红光下培养，8周后，分化 出愈伤组织。但在蓝光下培养，几周后才出现愈伤组织，而 唐菖蒲子球块接种15天后，在蓝光下培养首先出现芽，形 成的幼苗生长旺盛，而白光下幼苗纤细。 3、光周期(light period) □□试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养, □□ 最常用的周期是16h的光照，8h的黑暗。研究表明，对短H 照敏感的品种的器官组织，在短日照下易分化，而在长日照 下产牛愈伤组织，有时需要暗培养，尤其是一些植物的愈伤 组织在暗培养下比在光下更好。如红花、乌饭树的愈伤组织。 三、湿度(humidity) 湿度的影响包括培养容器保持和环境的湿度条件，容器 内主要受培养基水分含量和封口材料的影响。前者又受琼脂 含量的影响。在冬季应当适当减少琼脂用量，否则，将使培 养基干硬，以致不利于外植体接触或插进培养基，导致生长 受阻。封口材料直接影响容器内湿度情况，但封闭性较高的 封口材料易引起透气性受阻，也会导致植物生长发育受影 响。 环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发，一般要求 70%-80%的相对湿度，常用加湿器或经常洒水的方法来调节 湿度。湿度过低会使培养基丧失大量水分，导致培养基各种 成分浓度的改变和渗透压的升高，进而影响组织培养的正常 进行。湿度过高时，易引起棉塞长霉，造成污染。 四、渗透压 (penetrating pressure) 培养基中由于有添加的盐类、蔗糖等化合物，因此，而 影响到渗透压的变化。通常1-2个大气压对植物牛长有促进 作用，2个大气压以上就对植物生长有阻碍作用，而5-6个 人气压植物生长就会完全停止，6个人气压植物细胞就不能 生存。 五、PH值 不同的植物对培养基最适PH值的要求也是不同的（见 表），大多在5-6.5左右，一般培养基皆要求5. 8,这基本能 适应大多数植物培养的需要。 PH值适度因材料而异，也因培养基的组成而不同。以硝 态氮作氮源和以鞍态氮作氮源就不一样，后者较高一些。一 般来说PH值高于6. 5时，培养基全变硬；低于5时，琼脂 不能很好地凝固。因为高温灭菌会降低PH值（约0. 2-0. 3 个PH值）因此在配制时常提高PH值0. 2-0. 3单位。PH值大 小调节可用0. 1M的NaOH和0. 1M的HC1来调整。lml的NaOH 可使PH值升高0. 2单位，1ml的HC1可使PH值降低0. 2单 位。调节时一定要充分搅拌均匀。 六、气体(gas) 氧气是组织培养中必需的因素，瓶盖封闭时要考虑通气 问题，可用附有滤气膜的封口材料。通气最好的是棉塞封闭 瓶口，但棉塞易使培养基丁燥，夏季易引起污染。固体培养 基可加进活性炭来增加通气度，以利于发根。培养室要经常 换气，改善室内的通气状况。液体振荡培养时，要考虑振荡 的次数、振幅等，同时要考虑容器的类型、培养基等。