组织培养实验二.docVIP

实验二MS培养基母液配制与保存 一、 目的要求 学习培养基母液的配制，为培养基的配制做准备。 二、 基本原理 培养基是植物离体培养赖以生存的营养基质，是为离体培养材料提供近似活体生 存的营养环境，主要包括水、大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、糖、凝 I古I剂和植物生长调节物质。在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常将培 养基成分首先配制成比实际培养基浓度大若干倍的母液，然后在配制培养基吋， 再根据所需浓度按比例稀释。本实验以MS培养基为例，学习培养基母液的配制。 三、 试剂与主要用具 1、 仪器、用具 分析天平(感量o.oig和O.OOOlg)、药匙、玻棒、称量纸、吸水纸、滴管、洗 瓶、标签纸、烧杯(50ml、100ml、200ml)、容量瓶(100ml、200ml、500ml、 1000ml)、试剂瓶(100mL、200mL、500ml、1000ml)、量杯、量筒、移液管、 洗耳球、电炉等。 2、 试剂 95%乙醇、lmol/L NaOH、lmol/L HC1。 MS培养基各成分试剂。 植物生长调节剂:2, 4-D、6-BA、IAA、NAA等。 洗涤剂。 1、大量元素母液的配制 按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大10倍，按照表屮的次序分别准确称 量后，分别用50ml烧杯，加入蒸倔水30ml溶解(可以加热至60°C?70°C,促 其溶解)。溶解后，按顺序倒入一大烧杯屮(烧杯屮事先加入约50ml的蒸倔水, F1的避免由于盐浓度过高使钙离子与磷酸根离子、硫酸根离子形成不溶于水的沉 淀)，注意最后加入氯化钙溶液，混匀，用250讥容量瓶定容。将配制好的母液 倒入试剂瓶屮，贴好标签，保存于4C冰箱屮待用。 MS培养基大量元索母液(10倍)的配制剂量 母液 化合物名称 培养基用量 (mg/L) 扩大 倍数 称取量母液体积 (mg) (mL) 1L培养基吸 取母液量 (mL) 大 量 j ■ -rr° kno3 1900 4750 NH4NO3 1650 4125 MgSO4 - 7H20 370 10 925 250 100 儿 素 KILPO4 170 425 CaCl2 ? 2H20 440 1100 2、微量元素母液的配制 按照培养基配方的用量:，将微量元索各种化合物扩大100倍，用万分之一天平 分别准确称取，可以混合溶解，最后定容。将配制好的母液倒入试剂瓶屮，贴 好标签，于4C保存。 MS培养基微量元素母液(100倍)的配制剂量 母液 化合物名称 培养棊用量 (mg/L) 扩大 倍数 称取量 (mg) 母液体 积(mL) IL培养基吸 取母液量 (mL) MnSO」? 4H20 22. 3 223 微 量 ZnSO ? 7H20 8.6 86 II3BO3 6.2 62 KI 0. 83 100 8.3 100 10 儿 素 Na2Mo04 - 2H.0 0. 25 2.5 CuSO, ? 5II20 0. 025 10ml* CoCh ? 6IL0 0. 025 10ml** *、籽：因天平存在误差，为减少误差带来的影响，建议称取2. 5g,溶解并 定容至100ml容量瓶中,然后移取10ml,加入混合液中。 3、铁盐母液的配制 常用的铁盐是FeSOr 71L0和Na2-EDTA的螯合物，必须单独配成母液。配制时， 按照扩大后的用量，分别称取FeSO4 - 7H20和N^-EDTA,分别溶解后,将FeSO」 溶液缓缓倒入Na2-EDTA溶液(需加热溶解)，搅拌均匀使其充分螯合，定容后贮 放于棕色玻璃瓶屮，并保存于冰箱屮。 MS培养基铁盐母液(100倍)的配制剂量 母液 化合物名称 培养基用 量(mg/L) 扩大 倍数 称取量 (mg) 母液 体积 (mL) 1L培养基吸 取母液量 (mL) 铁盐 Na2-EDTA FeSO4 - 7H20 37.3 27.8 100 373 278 100 10 4、有机物母液的配制 按照表屮各成分浓度扩人后的用量，用感量0. 0001 g天平分别称量各有机物。混 合溶解定容，装入试剂瓶屮，写好标签，放入冰箱屮保存。 MS培养基有机物母液(100倍)的配制剂量 母液 有机物 名称 培养基 用量 (mg/L) 扩大 倍数 称取量 (mg) 母液体 积(讥) 1L培养基吸 取母液量 (mL) 有 机 物 甘氨酸 盐酸硫钱 素％ 盐酸毗哆 醇Vr6 烟酸 肌醇 1 O O 0 2 o ? ? ? 0 5 5 4 0 100 20 4 5 5 1000 100 10 一般有机物都溶于水,但叶酸(VBc)先用lmol/L NaOH溶液溶解;VH (生物素) 先lmol/L NaOH溶液溶解;%、%、应先用95%乙醇溶解，然后再用蒸憾水 定容。 5、激素母液的配制 激索母液必须分别配制，浓度根据培