番茄育种种质对南方根结线虫抗性评价及mi―1基因检测.docx

番茄育种种质对南方根结线虫抗性评价及 Mi—1基因 检测 在近几年的实验成果中得出 Mi 系列的 1 至 9 号抗性基因中 Mi-1 基因的抗虫性效果最突出，且已经广泛地应用到美国、荷 兰等国家的番茄育种当中。 我国在此领域中起步较晚， 但也取得 了一些具有研究价值的成果。通过对番茄后代植株中是否含有 Mi 系列基因进行监测，能帮助我国农业领域实现新的突破。 一、“仙客 1?”番茄育种种质对南方根结线虫抗性测评 1. 实验方法 （1）病土盘栽引病法。将分别来自亚洲地区、国内其他地 区以及广东省珠海市地区育种中心的实验用“仙客 1 号”番茄 不同种质同时进行播种， 模拟番茄自然生长的环境、 雨水和光照 等因素对其进行培育。 控制番茄播种土壤为变量， 番茄生长的土 壤控制为含有大量南方根结线虫幼虫的病土， 将病土、 肥料和砻 糠灰按照 7：1：2 的比例进行混合。由于珠海市地区的土质松软 并且砂性较强， 适合南方根结线虫繁殖生长， 因此培育番茄的病 土中数量会达到 800 条以上。将影响番茄生长的温度、 湿度等其 他因素作为定量， 把盘栽的番茄幼苗生长环境调整适宜， 并且不 对其进行杀虫剂和其他农药喷洒，使其自然发病。 （2）引入二期病虫幼虫方法。对“仙客 1 号”番茄种质使 用浓度为 5%的氯酸钠溶液进行杀毒清洗十分钟之后，再用清水 洗净种子上的溶液残留物质。 之后将种子分别放在含有双层滤纸 的培养器皿当中， 控制温度和湿度等作为定量， 对种子催生发芽。 待种子根部生长至 5 毫米时，再将其移植到无菌土壤当中。 相同 基因的番茄种子种植十份， 置于恒温恒氧的培育室当中。 因为土 壤为无菌培养土， 因此种子前期可以健康生长， 当幼苗根部平均 生长至 10 厘米以上时，在实验对象根部周围 2 厘米处钻孔，并 且植入事前配置好的根结线虫二期幼虫溶液，控制定量保持不 变，观察番茄后期生长变化。 2. 实验结果 笔者选取了我国广东省珠海市某番茄育种研究基地中用于 番茄育种实验的南方根结线虫幼卵进行培养，通过活体繁殖方 法，培育出适合番茄育种实验研究的南方根结线虫幼虫。此外， 笔者还将广东省珠海市果蔬培育中心的“仙客 1 号”的不同种 质进行对比分析试验。 其中， 将广东省珠海市果蔬培育中心含有 Mi-1 基因的“仙客 1 号”番茄种质作为试验对象，其他来自国 家育种中心以及亚洲研究中心的同种番茄不同育种种质作为对 照组，以方便获得更加直观的实验结果。 根据实验的结果可以得 出，“仙客 1 号”人工接种鉴定能表现出较高的抗病性。例如， 2号?6号、8号?15号、18号?21号、23号、25?28号等二 十二份育种种质同实验对象为 1 号的抗病性育种种质“仙客 1 号”进行对比， 发病率分别为 6.7%至 63.3%，根结指数为 0.1 至 1.1 ，均具有较高的抗虫能力。此外，实验结果还显示出，其中 17份高抗性育种种质和实验对象“仙客 1 号”相比，具有十分 显著的水平， 其余五份和“仙客 1 号”差异并不明显。 其中根结 指数为3.2?4.2的番茄育种种质表现出感病性和高感染性，同 其他对照组相比具有明显的差异性，且无免疫材料。 二、“仙客 1 号”番茄育种种质抗病性实验结论分析 番茄育种种质对南方根结线虫抗性的鉴定 通过实验分析得出，含有 Mi 系列基因的番茄种质通常具有 抗根结线虫的能力， 其中 Mi-1 基因的抗根结线虫能力最优。 Mi-1 基因对于多种根结线虫的预防和抵抗功能只在某一种群中最具 优势，并且根结线虫群体和与之相对应的抗性基因之间具有转化 特性。因此，在番茄种质育种的过程中，需要在番茄种质中利用 Mi-1 基因进行转基因培育。因为 Mi-1 基因对于最常见的 M.arenaria 、 M . incognita 以及 M.javanica 等三种根结线虫都 具有良好的抗性， 所以可以利用三种根结线虫的基因进一步提高 番茄中 Mi-1 基因对于其他种类根结线虫的抗性。。 番茄种质抗性材料 Mi-1 基因鉴定 （1）番茄基因的提取和检测。在广东省珠海地区育种基地 的“仙客1号”番茄品种进行取样和 DNA基因提取，引入物质 Mi-1F 以及 Mi-1R 对番茄中的 Mi-1 基因进行鉴定。通过对在培 育基地采集的新鲜番茄叶片组织进行取样， 在一百毫克的番茄叶 片组织中加入过量液态氮并且将二者充分研磨混合， 再利用 CTAB 法提取出样本中的DNA基因，最后将DNA存储于零下二十摄氏度 的冰柜之中，等待进一步分析和研究。 经过一段时间，将冰柜中的番茄 DNA基因调取，并且加入检 测用反应试剂，利用PCR反应测试对番茄DNA基因进行分析检测。 PCF的反应程序为将番茄DNA基因在94摄氏度中进行变形反应2 分钟，之后再进行 9