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碳纳米管修饰的纸传感器用于检测甲胎蛋白 1 引言 甲胎蛋白(a -Fetoprotein , AFP)是一种分子量为 69 kDa 的糖蛋白，是原发性肝癌的标记物之一， 血清中AFP的升高对原 发性肝癌的诊断具有非常重要的意义 [1 ， 2] 。正常人的血清中 AFP的含量一般低于20 ng/mL，若明显升高贝V可能患有肝肿瘤。 癌症的早期诊断对于癌症的成功治愈、 患者成活率的提高至关重 要。在癌症早期阶段，肿瘤标记物的含量非常低，而目前临床检 测常用的大多数分析仪器所需的分析时间较长。 为满足日益增多 的癌症前期或癌症早期恶性病变临床筛查的需求， 迫切需要发展 可实现快速、高灵敏检测的微型仪器。 纳米技术的发展， 以及随之而发展起来的新的纳米探针、 纳 米传感器和纳米分析体系大大扩展了生物传感技术在分子诊断 中的应用。 碳纳米管具有的独特的物理、 化学、光学和电学性质， 为光电信号传导和新一代生物电子 /生物传感器件的设计提供了 优良的平台[3]。特别是经DNA酶、抗体等生物分子功能化的 碳纳米管， 既具有碳纳米管本身的大比表面积效应和优良的电传 导性能， 也具备生物分子的特异性识别能力， 基于生物分子功能 化的碳纳米管构建的生物传感器可以有效地加速信号传导， 实现 信号放大， 提高检测的灵敏度和选择性， 减少所需样品和试剂的 用量。因此， 将碳纳米管应用于免疫传感器已引起人们的广泛关 注[4?6] 目前，碳纳米管的免疫传感器研究主要是将其作为传感器的 电极修饰材料，制作高特异性、高灵敏度的电化学免疫传感器 [7 ? 9] ，然而，这类传感器通常需要使用价格比较昂贵的玻碳或 者铂、金等贵金属作为电极材料，限制了其进一步的推广应用 [10] 。本研究采用廉价易得的标准化学分析滤纸为基底， 利用碳 纳米管 / 抗体混合液对滤纸进行包覆制作纸传感器，基于简单的 抗原 -抗体特异性反应的原理，通过检测纸传感器导电性的变化 实现AFP含量的测定。制备的纸传感器灵敏度和检出限皆可媲美 传统的ELISA试剂盒，且分析时间大大缩短，只需 5 min即可得 到样品的检测结果，适用于常规的癌症筛选。 2 实验部分 2.1 仪器与试剂 KQ-500DE超声清洗仪（昆山市超声仪器 XX公司）；HT7700 透射电子显微镜与 S-3400N型扫描电子显微镜（日本日立公司）； Z-603S 3D打印机（深圳市极光尔沃科技 XX公司）；DT-5302四 线低电阻测量仪（深圳华盛昌机械实业 XX公司）； 标准化学分析滤纸（杭州新华纸业 XX公司）；单壁碳纳米 管（SWCNTs直径1?2 nm,长度5?30卩m,纯度＞95% 中科 院成都有机所）； Pluronic F108 （PEO136-PPO45-PEO136 Mw=146O0 FLuka公司）；AFP单克隆抗体及 AFP （郑州博赛生 物技术XX公司）；0.01 mol/L磷酸盐缓冲溶液（PBS pH 7.4 ）； 其余试剂均为分析纯，实验用水为超纯水。 碳纳米管 - 抗体溶液的制备 准确称取适量SWCNT与1% (w/w)的F108溶液混合，在 40 kHz条件下超声12 h使之分散，制备浓度为5 mg/mL的碳管 分散液。在10 mLF108/SWCNT分散液中直接加入 AFP单抗1卩L, 使抗体终浓度为1卩g/mL,于微量振荡器上振荡， 使抗体均匀 分散在碳管液中，最终碳管与抗体质量比约为 5000： 1。 免疫纸传感器的制备 将滤纸裁成5 cmx0.5 cm的滤纸条，浸入碳纳米管-抗体溶 液中，使其与溶液充分接触，静置 10 min 后取出，低温干燥 30 min,以便最大限度减小抗体的变性失活。 重复上述浸渍-干燥循 环，直至滤纸条上沉积足量的碳管和抗体。 将干燥好的传感器置 于4C保存。利用扫描电镜对纸传感器进行表征。 甲胎蛋白的检测方法 用CAD2014软件设计滤纸夹持装置 3D模型，再利用3D打印 机制作其实体结构。利用夹持装置固定纸传感器，采用 DT-5302 四线低电阻测量仪作为检测仪器， 检测时调至电阻档。 测试时取 1卩L样品滴至纸传感器上进行测定，样品滴加在传感器上会形 成一个直径约为 0.5 cm 的浓缩、饱和的区域，在这个区域外围 放置两个铜片电极， 检测电阻变化。 记录测量区域的起始电阻值 与加样5 min内的最大电阻值，两者的差值记为 △ R以此作为 电阻对抗原浓度的信号响应的度量， 衡量免疫反应前后纸传感器 导电性的变化。 3 结果与讨论 3.1 SWCNTs的电镜表征 由于SWCNT的生物相容性及其在溶剂中的分散稳定性较 差，常需要对SWCNT进行生物功能化改性［11］，在碳纳米管表 面包裹具有生物相容性的聚合物， 是一种在碳管表面固定生物分 子的一种有效手段［