磁性石墨烯固相萃取―高分辨质谱法快速测定动物源性食品中磺胺类药物残留.docxVIP

磁性石墨烯固相萃取―高分辨质谱法快速测定动物 源性食品中磺胺类药物残留 磺胺类药物为合成的广谱抗菌剂， 对多数革兰氏阳性菌和阴 性菌有效。 由于磺胺类药物在体内作用时间和代谢时间较长， 通 过任何途径摄入的磺胺都有可能在人体中蓄积， 蓄积到一定值的 药物对人体机能是有害的 [1] 。目前，我国对磺胺类及其增效剂 的使用有比较明确的规定。 我国农业部第 235 号公告中规定， 禽 肉类产品中磺胺类总量不得超过 0.1 mg/kg;日本肯定列表中将 动物源性食品的最低限量定为 0.02 mg/kg ；欧盟 2377/90/EEC 中明确规定，在所有动物源性食品中磺胺类残留总量不能超过 0.1 mg/kg[2-3] 。 磁性石墨烯是由石墨烯化学制备而成， 磁性石墨烯纳米粒子 因具有很多特殊的磁性质，比如超顺磁性、高矫顽力、低居里温 度、高磁化率等，并且在磁流体、数据存储、催化、污染物处理 等很多方面都已有广泛的研究和实际应用。 所以石墨烯与磁性纳 米粒子复合成的磁性石墨烯受到了极大的关注， 并为石墨烯的应 用研究发展出了新的方向 [4-6] 。 目前，磺胺类及其增效剂残留的测定方法有高效液相色谱法 配合紫外检测器、 荧光检测器和质谱检测器 [7] 。液相色谱 - 三重 四极杆串联质谱（LC/MS/MS可以在一次分析中定量和鉴定数百 种目标化合物，具有很高的选择性和灵敏度。但是，这种方法需 要采用多种已知化合物优化仪器参数， 因此不能用于筛查未知化 合物。基于 Orbitrap 技术， Exactive 具有极高的质量分辨率， 从而保证了分析结果高质量准确度， 并可以?嗜返厍 ?分复杂样品 中同时洗脱出的具有相同质量数的化合物， 高达 3 个数量级的动 态线性范围，可轻松分析受复杂基体干扰的痕量化合物 [8-10] 。 本研究建立了动物源性食品中 13 种具有代表性的磺胺类药 物增效剂的快速前处理和高分辨质谱法联用的测定方法， 该方法 快速、准确，为监控动物源性食品中磺胺类药物增效剂残留提供 了技术支持。 材料与方法 1.1 试剂与材料 标准物质磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基 嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺 -5- （对）甲氧嘧啶、磺胺甲噻二 唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺 -6- （间）甲氧嘧啶、磺 胺邻二甲氧嘧啶、 磺胺甲基异 [XCZ1.tif] 唑、磺胺喹 [XCZ1.tif] 啉，均购自DR公司，纯度均大于99% 1.1.2 试剂与耗材乙腈，甲醇均为色谱纯（ Fisher ）；无水 硫酸钠，分析纯（烟台市双双化工）；甲酸，色谱纯（ TEDIA）； 水， GB/T 6682 规定的一级水；磁性石墨烯，实验室制备；硫酸 铜，优级纯（天津市北联精细化学品开发 XX公司）；1- （2-吡 咯偶氮）-2-萘酚（PAN，分析纯（北京化学试剂 XX公司）； C18粉（天津艾杰尔）。 1.1.3 仪器液相色谱仪， Thermo UltiMate3000 ，静电场轨 道肼质谱仪（Thermo EXACTIVE ;分析天平，感量 0.1 mg和 0.01 g各1台；离心机，5810型（Eppendof公司）；均质器 （T25 型，IKA 公司）；振荡器（MMV-1000,ETELA公司）；氮 吹仪（N-EVAP ;涡流混匀器（IKA MS basic ）。 1.1.4 标准溶液配制 磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲 基嘧啶、磺胺 -5- （对）甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒 嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺 -6- （间）甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、 磺胺甲基异 [XCZ1.tif] 唑、磺胺喹 [XCZ1.tif] 啉：用乙腈溶解， 按纯度标示折算配制成100卩g/mL的标准储备液。 试验方法 样品提取 准确称取2.00 （± 0.02 ） g待测样品置于100 mL离心管中， 加入 5 g 无水硫酸钠， 2 g 氯化钠， 10 mL 0.1% 甲酸/乙腈，均 质 2 min ， 10 000 r/min 离心 10 min ，将上清液转入另一干净 离心试管中，重复提取残渣 1次，取上清液合并，加入10 mL正 己烷，振荡 5 min 后静置，去掉上层正己烷层。将提取液旋转蒸 发至干，加入3 mL乙腈/水溶解，待净化。 样品净化 准确称取 20 mg 磁性石墨烯于 10 mL 离心管中，分别加入 2 mL丙酮、甲醇和去离子水，依次清洗磁性石墨烯。取 5 mL上清 液入离心管中，涡混10 min，静止萃取5 min。用磁铁将磁性石 墨烯聚集到离心管底部，弃去上清液，将磁性石墨烯转移至另 1 个干净的离心试管中，加入1 mL乙腈-氨水（体积比为95 : 5）, 涡旋 2 min 洗脱，重复洗脱 4 次，合并洗脱液，氮气吹干，流