磺酸化磁珠富集鱼塘水中的孔雀石绿.docxVIP

磺酸化磁珠富集鱼塘水中的孔雀石绿 g/g ， Langmuir 吸附平衡常数为 0.375 L/ g。 引言 孔雀石绿（Malachite green , MG 属碱性三苯甲烷类染料， 由于抗菌、 抗寄生虫效力较强且价格便宜， 被广泛用于池塘水的 水体消毒和防治鱼类的水霉病、烂鳃病以及寄生虫病。 MG易被 鱼体吸收并迅速代谢为脂溶性的隐色孔雀石绿（ LMG，具有致 癌、致畸、致突变等副作用。 许多国家都禁止将其用于水产养殖。 因此，严格监控鱼塘水孔雀石绿残留量对于建立无公害水产养 殖， 保证食用者健康具有重要意义。 目前，含MG样品的前处理一般采用液-液萃取法，然后通过 强阳离子型固相萃取柱富集、净化。整个过程繁琐、耗时， 有 机溶剂使用量大。 分散固相萃取方法是近年来发展较快的样本前 处理技术，具有快速、简便、廉价、高效、稳定、安全且可直接 用于浑浊样本的前处理等优点。 然而， 分散固相萃取采用的吸附 剂粒径均为几十微米， 材料比表面积较小， 且不能在溶液中悬浮。 纳米级超顺磁性材料因其良好的磁响应性以及溶液分散性， 在分 子生物学、 生物医学以及环境科学等领域得到了广泛应用。 近年 来，有关表面功能化磁珠在食品安全样本前处理方面的报道逐渐 增多。 本研究将纳米至亚微米级磺酸化磁珠应用于水样中孔雀石 绿的富集， 有效地简化了孔雀石绿样本前处理步骤， 缩短了前处 理时间。建立了针对含痕量孔雀石绿鱼塘水样品的分散固相萃取 前处理方法。 实验方法 仪器与试剂 Waters 2489高效液色谱仪（ Waters 公司）；磁架（无锡中 德伯尔公司）； FS-1200 超声波处理器（上海生析超声仪器 XX 公司）；PSA NANO2590 Zeta电位分析仪（英国马尔文公司）； JEM-1200EX透射电镜（日本电子公司）； FTIR Nicolet5700 傅 里叶变换红外光谱仪（美国热电尼高力公司）；离心机（ Sigma 公司）；纯水仪（ Milipore 公司）。 孔雀石绿（ MG） , 1- 乙基 - （ 3- 二甲氨基丙基）碳酰二亚胺 （EDC、N-羟基硫代琥珀酰亚胺（Sulfo-NHS ）、 FeCI3#8226;6H2O FeCl2#8226;4H2O （分析纯，Sigma 公司）； 苯乙烯、丙烯酸、对氨基苯磺酸（分析纯，上海国药集团化学试 剂XX公司）；其它试剂均为分析纯。实验用水为超纯水。池塘 水，取自当地鱼塘。 磁珠的制备方法 2.2.1 羧基化磁珠的合成 参照文献 方法，采用化学共沉淀 法合成超顺磁性Fe3O4纳米颗粒，再将Fe3O4纳米颗粒表面油酸 化，无水乙醇洗涤后用氮气吹干。 用苯乙烯-环己烷（10： 1, V/V） 混合液悬浮Fe3O4纳米颗粒，超声5 min，将有机相转入SDS和 NaHCO溶液悬浮，继续超声15 min，乳化形成微乳液。加K2S2O8 于70 C反应30 min后加入丙烯酸，继续反应 10 h。磁架吸附 磁珠， 95%乙醇洗涤磁珠表面至溶液无泡沫产生。 ? :n ?析化学?n ?39卷 ?n ?5期?〒沤万牡龋夯撬峄？磁珠富集鱼塘水中的孔雀石 绿？ : ? 磺酸化磁珠的合成及预处理 取 500 mg 羧基化磁珠（表面羧基密度为 2.5 mmol/g ），分 散于 15 mL 0.1 mol/L 硼酸盐缓冲液（ pH 5.0 ）中，按磁珠表面 羧基密度与 EDCSulfo-NHS摩尔比为1 : 2 ：2分别加入47.9 mg EDC以及54.3 mg Sulfo-NHS，混合液室温振荡反应 0.5 h。磁 架回收磁珠，以 10 mL 0.1 mol/L 硼酸盐缓冲液（ pH 5.0 ）洗涤 磁珠两次。将 10 倍于磁珠表面羧基密度的对氨基苯磺酸溶液加 入活化磁珠体系，溶液调至 pH 8.0，室温下振荡反应2 h。磁架 回收磁珠，制备好的磺酸化磁珠采用饱和食盐水浸泡 1 h、3%NaOH 以及3% HCl浸泡洗涤各2 h，最后以0.01 mol/L磷酸盐缓冲液 （pH7.0 ）洗涤磁珠至pH值为中性，并将磁珠重悬于0.01 mol/L 磷酸盐缓冲液（pH 7.0 ）中，于4 C保存备用。 2.3磺酸化磁珠富集水体中 MG的检测流程 取10 mL鱼塘水，加入适量磺酸化磁珠，振荡混匀，避光静置吸附10 min,磁架分离磁珠，以0.01 mol/L磷酸盐缓冲液（pH 5.0 ）洗涤磁珠一次， 200 L洗脱溶剂洗脱磁珠吸附的 MG洗脱液经0.45 m 滤膜过滤后直接用高效液相色谱法检测。流动相为 50 mmol/L乙酸铵-乙腈缓冲液（4： 6, V/V, pH 4.5 ），洗脱液流 速为 1.0 mL/min； Sunfire C18色谱柱（250 mrW4.6 mm 5 mr）, 柱温25 C