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DNA琼脂糖凝胶电泳 跑胶即走电泳，是 DNA和protein最基本的定性定量方法。一般是琼脂糖胶或 page 胶，琼脂糖胶一般是检测 DNA的，可以检验一下你到底提到 dna没过确定你提dna分子量 的大小：page胶一般是检测蛋白特性的，通过 page胶里marker的分子量大小来确定你需 要的目的蛋白分子量大小， 如果有杂带那就可以判断那条带是你需要的目的条带， 如果想知 道蛋白浓度，还可以在page胶里带上一条定量 marker，通过条带粗细，来判断你需要蛋白 的浓度。二者原理一致，小分子量用大浓度的胶，大分子量用小浓度的胶，特别小的 DNA 用丙烯酰胺凝胶。 一、 基本原理 当把一个带净电荷（q）的颗粒放入电场，便有一个电场力 （F）作用于其 上。F的大小取决于颗粒静电荷量及其所处的电场强度 （E），它们之间的关系 可以表示成：F=EX q。 由于F的作用，使带电颗粒在电场中向一定方向泳动。此颗粒在泳动的过程 中还受到一个相反方向的摩擦力（f*v）阻挡。当这两种力相等时，颗粒则以 速度（v）向前泳动：v=F/f,其中f为摩擦系数。根据Stoke公式，阻力大小 取决于带电颗粒的大小、形状以及所处介质的粘度，即 f=6 n 丫 n , 丫为颗 粒半径，n为介质粘度。该公式指球形颗粒所受的阻力。 代入F= EX q得到： v=EX q/6 n 丫 n ?从这个公式可以看出，带电颗粒在电场中泳动的速度与电 场强度和带电颗粒的净电荷量成正比， 与颗粒半径和介质粘度成反比。 带电颗粒在电场中泳动的速度常用泳动度（m）或者迁移率以下列公式表示： m=卩 /E=d*l/V*t d为带电颗粒泳动的距离（cm），l为支持物的有效长度（cm），t为通电时 间（s），V为加在支持物两端的电压。 在一定条件下，任何带电颗粒都具有自己特定的泳动度。它是胶体颗粒 的一个物理常数，可用其鉴定蛋白质、核酸等物质的纯度，还可以用其来研 究蛋白质、核酸等物质的一些理化性质。影响泳动度的因子有颗粒的性质、 电场强度、溶液的性质等。 二、 琼脂糖凝胶电泳 通常情况下，核酸类物质的分离、鉴定是采用琼脂糖凝胶 （做支持物）电 泳法进行的。用琼脂糖分离线性 DNA时，其迁移率与该物质分子质量的关系 密切，而与结构和碱基组成无关。这也是采用凝胶电泳法测定核酸分子质量 的依据所在。此方法除了可以分离线性 DNA外，还可以分离、分析细菌质粒 的闭环DNAffi开环DNA以及分子质量不等的 RNA片段。一般实验室采用的 琼脂糖凝胶的浓度为 0.3%——2%不同的凝胶浓度，可以分离不同长度的 DNA片段。具体见表格： 琼脂糖凝胶/% m/V 分离线性DNA片段的范围/kb 0.3 5060 0.6 120 0.7 0.810 0.9 0.57.0 0.4——6.0 0.33.0 0.12.0 琼脂糖凝胶电泳常用的缓冲液: 缓冲液 pH 1.50mmol/L Tris-NaH 2PQ-1--5mmol/L EDTA 7.58.0 2.50mmol/L NaHPQ Na 2HPQ1--5mmol/L EDTA 7.58.0 3.50mmol/L Tris-乙酸-1--5mmol/L EDTA 7.58.0 4.50mmol/L 乙酸钠-乙酸-1--5mmol/L EDTA 7.58.0 5.89mmol/L Tris-H 3BQ-1--5mmol/L EDTA 8.3 琼脂糖凝胶电泳常用的样品缓冲液（示踪染料）：0.25%溴酚蓝-0.25%二甲苯 青FF-30%甘油水溶液，并且这两种指示剂在琼脂糖凝胶中的迁移率不同， 可 以指示一定片段长度的DNAf移率（具体见下表）。 琼脂糖凝胶浓度 溴酚蓝 二甲苯青 0.6% 1kb / 1.0% 0.6kb 2kb 1.4% 0.2kb 1.6kb 2.0% 0.15kb / 核酸分子量标准（Marker） ： DNA电泳一定要用 DNA Marker或者是已知大小的正 对照DNA来估计片段的大小。应该选择在目标片段大小附近 Ladder较密的 Marker，这样对于目标片段大小的估计才比较准确。 核酸电泳染色剂：核酸电泳以后，需要经过染色才能显现带型，最常用的染色剂 是溴化乙锭（EB），其次是银染法。 1、 溴化乙锭（ethidium bromide）: 一种荧光染料，可以嵌入核酸的双链碱基对 之间，在紫外光线的激发下，发出红色荧光。 2、 银染法：染色液中的银离子可与核酸形成稳定的复合物，然后用还原剂如甲 醛使银离子还原成银颗粒，可以将核酸带染成黑色。灵敏度比 EB高，但是 DNA不易回收。 琼脂糖凝胶电泳 的操作步骤如下： 制备1%琼脂糖凝胶（大胶用70ml,小胶用50ml）:称取0.7 g（0.5 g）琼脂糖 置于锥形瓶中，加入7