分子诊断在感染性疾病中的应用.docx

分子诊断在感染性疾病中的应用 袁艳军 感染的慨念 口感染是病原体在宿主的个体内进行有害的复制、繁殖过程. □病原体:细菌、真菌、病毒、支原体、衣原体、螺旋体、寄生虫 □条件致病菌 共生状态在正常情况下，人体的一些腔道和体表均有微生物寄生不同的感染状态 共生状态 在正常情况下，人体的一些腔道和体表均有微生物寄生 不同的感染状态 感染性疾病的分子诊断策略 ? 一般性策略（检出病原体的DNA/RNA）: -判断有无感染 -是何种病原体感染 -常用方法：PCR +分子探针杂交 ?完整性策略 -检出病原体 -分型（分类）一亚型一耐药性 1=-常用方法：杂交、PCR、基因芯片、DNA测序 1= 感染性疾病的分子诊断临床价值 ,分子生物学检验技术在感染性疾病中的应用主要 包括对病原生物进行鉴定、分型、耐药诊断和治 疗过程中的疗效监测等 ?动态、定量地检测病原体核酸，能对疗效判断和 病情预后评价提供客观的依据 ?目前已经应用于一些重要的感染性疾病，如结核 病、病毒性肝炎、艾滋病、SARS、人禽流感等 -（-）结核分枝杆菌 -（-）肝炎病毒 蜘（三）人类免疫缺陷病毒 -（四）HPV病毒 跡（五）SARS冠状病毒 结核分枝杆菌 结核分枝杆菌(M.tuberculosis) 感染方式 七 呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入 机体 所致疾病 疾病种类多样化 以肺结核为主 生物学主要特点： 1 ?结核分枝杆菌细胞壁中含有大量脂质 2?引起的疾病都呈慢性，并伴肉芽肿 3 .抗酸染色阳性 实验室诊断现状 抗酸涂片：灵敏度低,易漏诊 不能区分TB/NTM细菌培养:耗时 抗酸涂片： 灵敏度低,易漏诊 不能区分TB/NTM 细菌培养: 耗时4?8周 C3 菌种解.药敏成佥: 再加4-8 灵敏度,时效性,快速鉴别诊断均无法实现! 分子生物学检测方法 ?近年来核酸扩增技术和杂交分析技术的发 展，为分枝杆菌的检测、鉴定和药敏实验 提供了极大的方便，可将诊断时间从几周 降低到几天。 ?结核病基因诊断技术主要包括聚合酶链反 应(PCR)、核酸探针杂交、DNA序列测定、 基因芯片、基因分型等。 基因结构 分子诊断 基因组特点 共价封闭环状结构 分枝杆菌分子诊断系统 实时荧光PC R 基因芯片快速检测平台 分枝杆菌核酸检测 分枝杆菌菌种鉴定 结核分枝杆菌耐药基因检测 菌种鉴定 菌种鉴定 MDR早期诊断 PAGE PAGE # 分枝杆菌核酸检测 功能：TB快速筛查；TB/NTM鉴别诊断 A高效： f 样本可同时检测结核分枝杆菌和NTM A快速：4周(菌培)T小时 ?灵敏：10个菌/反应(TB ) ; 102个菌/反应(NTM ) 分枝杆菌菌种鉴定（DNA微阵列芯片法） 检测范:结核、胞内、鸟、戈登、堪萨斯、偶然、痙痂、浅黄、 土、龟-脓肿、草、不产色、海-溃疡、金色、苏尔加、蟾赊、耻垢。 检测范 效：同时检测17种分枝杆菌（包括TB ） 卜快 速：＞ 4周（菌种鉴定） 6小时 A灵敏：1CP个菌/反应 结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒 基于rpoB （利福平）和katG/inhA （异烟駢）的基因突变,对 耐多药结核病做出快速诊断。 卜通量：两个一线抗结核药（MDR） ?速度：8周（药敏） 6小时 ＞灵敏度：10,个菌/反应 病毒性疾病的分子检测 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV ) ?全世界有3.5亿慢性携带者, 75 %在亚太地区 ?每年有一百万人死于HBV感染, 是全球范围内第9位死因 50%?70%的人受过感染, 75 %的长期慢性携带者来自亚太地区 中国: 8%?10%是HBV携带者 HBV的形态特征 二卜角花 二卜角花lucMhetiwlGTO iCJ- 小糸讪诙Vr S^rdl urfir.? firoiw (SJ 牛血或白 —c.rtiefii ^rrnfiir (“Pro 码 ?.*穴.向埶 a _flw y Mgr ortart fJU FH-^ + PiaBil 口最常见的血清型为adw、adr和ayw □亚型的地区分布不同，我国以adr为主, adw次之，而ayw见于新疆、西藏和内 蒙古等地 □Na Hepatiiis Bvirus 乙肝表面 脂层（来自 宿主细胞）乙肝核心抗原 脂层（来自 宿主细胞） 乙肝核心抗原 CQCCQ J^mos A.七伽$ DNA病毒 二生（非环状） DNA不等长 口正链（2/3） 口负链 HBV基因组结构 Region X: 泌 基因重叠 编码 zpre-Sl — S区 pre-S2 — pre-C pre-Sl蛋白 pre-S2蛋白 HBsAg HBeAg HBcAg DNAP HBxAg HBsAg pre-S2 pre-Sl 急性感染时期HBV 急性感染时期HBV的