临床生物化学：第六章 临床酶学检验技术.pptVIP

* * * * 在特定的条件下，1 min能转化1μmol底物的酶量，即1IU=1μmol/min。 写NAD(P)H系统比NADH系统更全面，下同。 * * 包括理论教材，都没有纵坐标，应该为浓度。最好是能在理论教材中也改过来。 生化项目的危机值可以列个表，给学生总结很有用 生化项目的危机值可以列个表，给学生总结很有用 生化项目的危机值可以列个表，给学生总结很有用 EDTA——络合重金属离子，使常用的金属离子呈游离状态，发挥激活作用。 GGT为1：11，不是特例 字体的统一！ 小标的重复，已删除！ （二）AST推荐方法 1. α-酮戊二酸的用量（15mmol/L) 2.内源性丙酮酸和GLDH的干扰(双试剂底物启动） 3.添加5’-磷酸砒哆醛（恢复脱辅基酶的活性） 4.两个指示酶（MD／LD，草酰乙酸不稳定） 5.预孵育期长（消除内源性丙酮酸干扰） （三）注意事项 L-丙氨酸 ＋ α-酮戊二酸 α-丙酮酸 ＋ L-谷氨酸 丙酮酸 ＋ NADH ＋ H+ 乳酸 ＋ NAD+ ALT（样品） LD（试剂） 酶偶联法测定ALT 340nm －△A/min α-酮酸 标本中 GLDH 标本中 ① ② 试剂1 试剂2 图4-2 IFCC推荐法测定ALT的时间进程曲线 1.比色法 2.连续监测法 3.荧光法 4.化学发光法 （一）方法选择与评价 二、肌酸激酶测定 （二）CK推荐方法 1.缓冲液和pH（醋酸咪唑） 2.巯基激活物（NAC／谷光甘肽＋巯基乙醇） 3.腺苷酸激酶的干扰和消除（2ADP?AMP+ATP 4.EDTA的作用（消除Ca对Mg的抑制、防止NAC氧化） 5.样品保存（室温4h，4度8-12h） （三）注意事项 1.以布氏（Bodansky）法为代表：β-甘油磷酸钠做底物 2.以金-阿（King-Armstrong）法为代表：磷酸苯二钠做底物 3.以皮-劳（Bessey-Lowery-Brock）法为代表：人工合成底物：磷酸对硝基酚二钠盐（PNPP） （一）方法选择与评价 三、碱性磷酸酶的测定 （二）ALP推荐方法 1. AMP缓冲液（含杂质少、温度依赖小） 2.底物有一定自身水解作用(设试剂空白A限制） （三）注意事项 1. L-γ-谷氨酰-α（β）-萘胺做底物，催化生成的α（β）-萘胺与重氮试剂生成红色化合物 2. γ-L-谷氨酰对硝基苯胺（GNA）做底物，催化生成的对硝基苯胺在碱性环境下呈黄色，可以连续监测 3. 3-羧基-γ-L-谷氨酰对硝基苯胺（GCNA）做底物，催化生成的2-硝基-5-氨基苯甲酸在碱性环境下呈黄色，可以连续监测 （一）方法选择与评价 四、 γ-谷氨酰基转移酶的测定 （二）GGT推荐方法 1. 若反应温度37℃时最适pH则为7.70 2. 5-氨基-2-硝基苯甲酸在410nm的摩尔消光系数为7.96 ×103（pH为7.70） 3. 样品体积分数0.0909（孵育180s、底物启动） （三）注意事项 1.一类方法是利用正向反应（L→P），以乳酸为底物，测定反应中NAD+的还原速率。分为定时法和连续监测法 2.另一类方法是利用逆向反应（P→L），以丙酮酸为底物，测定反应中NADH的氧化速率。为连续监测法 （一）方法选择与评价 五、乳酸脱氢酶及其同工酶的测定 （二）LD推荐方法 1. 37℃时最适pH为9.4，使用Tris缓冲液显然不合适，而改用N-甲基-D-葡糖胺做缓冲液 2. 在各类乳酸盐中，乳酸锂首选。关于NAD+应选择游离酸型与锂盐的混合型（游离酸：锂盐=1：5） 3. LD4和LD5对冷不稳定，故样品不宜冰箱存放 4. M和H亚基的理化性质相差悬殊，很难兼顾 5.方法不同结果报告不同 （三）注意事项 1.一类是以天然淀粉为底物的测定方法：水解前后粘度或浊度；测产物葡萄糖；淀粉与某些活性染料呈色的；碘遇直链淀粉呈兰色碘淀粉比色法曾一度作为临床最常用的方法 2.另一类方法是以人工合成的麦芽寡糖苷为底物的测定方法，与天然底物相比，最突出的优点是底物的结构和分子量确定 （一）方法选择与评价 六、淀粉酶的测定 （二）AMY推荐方法 1. HEPES缓冲系统随着pH升高PNP的摩尔消光系数会加大 2. α-葡萄糖苷酶对底物有缓慢的水解作用 3.多功能α-葡萄糖苷酶 （三）注意事项 1.一类是以乙酰胆碱酯做底物，常用的底物有氯化乙酰胆碱、碘化乙酰胆碱，生成产物乙酸造成pH下降，然后通过以下方法测定①pH差示法 ②pH指示剂法 ③羟胺比色法 2.第二类是以碘化乙酰硫代胆碱做底物，测定方法有①产物硫代胆碱与5-巯代-2-硝基苯甲酸（DTNB）