高敏PCR检测在乙肝诊疗中的应用及价值.pptxVIP

中南大学湘雅二医院 陈 军;我国乙肝的流行现状 高敏PCR监测在慢乙肝治疗中的应用价值及现状 新型国产高敏PCR检测技术的性能评价;Wang FS, Fan JG, Zhang Z, Gao B, Wang HY. The global burden of liver disease: the major impact of China. Hepatology, 2014 ,60(6):2099-108;流 行 病 学;;;“十一五”重大传染病专项计划病毒性肝炎重大研究专项启动 ;慢乙肝的致病本质是由病毒复制引发的免疫清除给肝细胞带来的损伤;HBV感染的发展史;HBV DNA;自 然 史;全球权威指南一致认为：乙肝治疗的根本目的在于长期持续抑制病毒复制，阻止疾病进展;慢性乙型肝炎治疗目标;慢性乙型肝炎治疗终点;我国乙肝的流行现状 高敏PCR监测在慢乙肝治疗中的应用价值及现状 新型国产高敏PCR检测技术的性能评价;抗乙肝病毒药物的研发进展;慢乙肝的抗病毒治疗;抗病毒治疗无异于病人的二万五千里长征！;那么，万里长征的路标是什么？;慢乙肝常用实验室诊断与监测指标;不同路标提供不同的诊断和治疗监控信息;HBV DNA路标的临床意义;肝癌与肝硬化患病风险研究:准确的基线HBV DNA检测有助于风险评估;筛查抗病毒治疗的对象：判断治疗起点;筛查抗病毒治疗的对象：判断治疗起点;筛查抗病毒治疗的对象：判断治疗起点;慢性HBV感染者管理流程图;PegIFNα抗病毒疗效的预测因素;2010;抗病毒治疗推荐意见---HBeAg阴性患者;代偿期和失代偿期乙型肝炎肝硬化;;乙肝病毒核酸载量PCR检测的国际指南;国际乙肝治疗指南对HBVDNA定量PCR要求;国际乙肝治疗指南对HBVDNA定量PCR要求;国外HBV DNA 检测试剂性能的比较;;国内HBV DNA定量检查的现状;我国乙肝的流行现状 高敏PCR监测在慢乙肝治疗中的应用价值及现状 新型国产高敏PCR检测技术的性能评价;圣湘Natch S全自动核酸提取系统+磁珠法HBV定量PCR检测试剂性能评价;新型国产HBV DNA检测试剂的质量评价;1.定量检测HBV感染者血浆(清) HBV DNA是了解肝内HBV复制水平的可靠指标，也是HBV感染诊断、疗效监控和指导用药的重要指标。 2.目前我国市场上主流的国产HBV DNA定量试剂盒多是基于即将废除的煮沸法核酸提取方法，检测下限一般为500~1000 IU/ml，不能满足临床诊断的需求。多数试剂的灵敏度、准确性及重复性等与进口优质试剂??比，仍存在较大差距。 3.在国家“十一.五”和“十二.五”传染病防治重大专项等国家项目的支持下，基于磁珠法核酸提取的国产HBV DNA定量试剂盒已成为主流研发方向。;1.对WHO的HBV DNA标准品的可溯源性分析：确定试剂盒检测的可靠性。 2.对HBV B和C基因型标准血浆检测的重复性分析：比较其准确度和精密度。 3.对临床血清盘的检测结果分析：评价其相关性和符合率;;WHO genotype A2 Panel;可朔源性分析结果;由第三方提供高浓度的HBV BC亚型标准血浆。血浆HBV病毒载量须大于1,000,000。 以上血浆用HBV阴性EDTA抗凝血浆进行稀释。稀释浓度设定6个评价节点：25、 50、200、2,000、20,000 、200,000 IU/mL。 每天每种仪器检测上述稀释浓度样本一个反应（含对照管）。共检测三天（即每种浓度检测3次）。 准确度判断标准为所有检测节点上的的相对偏差 均在±0.3 lg IU/ml之内为可接受范围。精确度判定依据对同一检测节点平行检测9次后的变异系数，变异系数越小意味精确度越高。 以上检测将在北京大学医学部微生物系、首都医科大学附属佑安医院、湖南湘雅医院传染病科三地多中心同时进行。;两种定量试剂对HBV BC亚型的准确度和精密度的比较;两种定量试剂对HBV BC亚型标准血浆的相对性偏差分析;两种定量试剂对HBV BC亚型标准血浆在不同节点变异系数的比较分析;2种试剂盒对HBV DNA低载量血浆样本检测的变异系数均显著高于高载量血浆(B基因型：P=0.0031；C基因型：P=0.0005)。;临床血清盘初步评价;两种HBV DNA定量试剂测定37份临床血清盘阳性样本结果;临床血清盘中有2个样本（编号236和283）Roche HBV试剂检测是低于检测下限。用圣湘磁珠法试剂反复检测结果均在10 IU/ml左右。 ?我们在圣湘公司试剂检测靶基因区域之外，设计了套巢式引物进行PCR扩增和克隆测序，同时严格设置阳性质控和阴性质控，把扩增产物送往测序公司进行克隆测序。 结果证实编号236和283两个样本的测序结果为HBV基因组序列，测序长度为258bp，与理论序列长度一致