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不同产地壮药三七姜乙酸酯提取物抗炎、镇痛作用的谱-效关系研究 摘要：目的：考察不同产地壮药三七姜乙酸乙酯提取物抗炎、镇痛作用的谱-效关系。方法：以不同产地的10批三七姜为样品，分别以二甲苯致小鼠耳廓肿胀、乙酸致小鼠扭体反应实验考察其乙酸乙酯提取物的抗炎、镇痛活性。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》建立10批三七姜乙酸乙酯提取物的高效液相色谱指纹图谱并进行相似度评价，通过与对照品比对进行共有峰的指认。基于Pearson相关系数法（以小鼠耳肿胀度和15 min内扭体次数为药效指标）和灰色关联分析法（以耳肿胀抑制率和镇痛率为药效指标）分析三七姜乙酸乙酯提取物抗炎、镇痛的谱-效关系。结果：10批不同产地三七姜乙酸乙酯提取物均具有较好的抗炎、镇痛作用，其对小鼠的耳肿胀抑制率为46.43%～55.16%，对小鼠的镇痛率为45.56%～52.72%。10批样品共确定了18个共有峰，其与对照指纹图谱的相似度为0.994～0.997。通过与对照品比对，指认出了峰1、2、4分别为原儿茶酸、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛。Pearson相关性分析结果显示，峰10、18与小鼠耳肿胀度和15 min内扭体次数均呈显著负相关（r分别为-0.853、-0.738,P分别为0.002、0.015）；灰色关联分析结果显示，18个共有峰与耳肿胀抑制率和镇痛率的关联度均在0.65以上，其中峰14、1（原儿茶酸）、17、9、4（对羟基苯甲醛）、2（对羟基苯甲酸）、16、7、6与耳肿胀抑制率的关联度相对较高（关联度均高于0.7），峰1（原儿茶酸）、17、14、9、16、2（对羟基苯甲酸）、4（对羟基苯甲醛）与镇痛率的关联度相对较高（关联度均高于0.7）。结论：三七姜乙酸乙酯提取物具有较好的抗炎、镇痛作用，峰1（原儿茶酸）、2（对羟基苯甲酸）、10、14、17、18等可能是其主要活性成分。 三七姜为姜科Zingiberaeeae姜七属植物土田七Stahlianthus involucratus(King ex Bak.)Craib.的块根和根茎，又称土田七、小田七、竹田七、毛七、姜三七、姜田七等，其性温，味辛，具有散瘀、止痛、止血等功效，主治跌打损伤、风湿骨痛等本课题组前期对三七姜不同溶剂提取物的抗炎、镇痛作用进行了研究，发现其乙酸乙酯提取物具有显著的抗炎、镇痛作用。目前，谱效学已被学者广泛应用于中药的活性成分和药理作用关系的研究中，其可通过数理统计方法，快捷地筛选出中药的活性成分，从而分析其药理活性的物质基础1 材料1.1 主要仪器本研究所用主要仪器包括1100型HPLC仪（美国Agilent公司）、CPA225D型电子天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]、KQ5200B型超声波清洗器（昆山市超声波仪器有限公司）、UPC-Ⅱ-10T型实验室超纯水器（四川优普超纯科技有限公司）、HH-S型恒温水浴锅（江苏金坛市医疗仪器厂）、TGL-16G型离心机（上海安亭科学仪器厂）等。1.2 主要药品与试剂10批三七姜药材均由本课题组自行采摘，所有药材经广西中医药大学滕建北教授鉴定均为姜科植物土田七S.involucratus(King ex Bak.)Craib.的块根和根茎，其具体来源信息见表1。复方醋酸地塞米松乳膏（批号1812012S，规格20 g∶15 mg）购自华润三九医药股份有限公司；双氯芬酸二乙胺乳胶剂[批号VP2181，规格20 g∶0.2 g（以C1.3 实验动物实验所用动物为健康SPF级KM小鼠，共240只，雄性，体质量为18～22 g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，动物生产许可证号为SCXK（湘）2016-0002。所有小鼠购入后均饲养于广西中医药大学实验动物中心，饲养期间均自由摄食、饮水。实验方案经广西中医药大学伦理委员会批准，实验过程严格遵守《广西中医药大学实验动物管理条例》。所有小鼠均适应性喂养7 d后进行后续实验。2 方法与结果2.1 三七姜乙酸乙酯提取物的制备称取不同产地三七姜粗粉适量，加入8倍量（m L/mg）的80%乙醇，加热回流提取3次，每次2 h，分别滤过并合并3次滤液，减压浓缩至无醇味，得到三七姜80%乙醇总提物。将总提物用水分散后，依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取3次，分别合并萃取液，回收乙酸乙酯部位萃取溶剂，蒸干，即得到不同产地三七姜药材的乙酸乙酯提取物（得率约为1.23%）。将所得提取物密封后置于4℃冰箱中保存，备用。2.2 不同产地三七姜乙酸乙酯提取物的抗炎、镇痛作用临用前，将“2.1”项下10批不同产地三七姜乙酸乙酯提取物分别用水配成质量浓度均为1.5 g/m L（按生药量计）的混悬液，备用。2.2.2 三七姜乙酸乙酯提取物的抗炎作用研究将120