NFκB和Stat3信号途径在胃癌组织和细胞系中的活化临床医学.docVIP

NFκB和Stat3信号途径在胃癌组织和细胞系中的活化临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：NFκB和Stat3信号途径在胃癌组织和细胞系中的活化临床医学 1 1 材料与方法 2 2 结果 3 3 讨论 4 文2：Wnt信号途径在胃癌组织和细胞系中的活化 5 1 材料与方法 6 2 结果 7 3 讨论 8 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 11 正文 NFκB和Stat3信号途径在胃癌组织和细胞系中的活化临床医学 文1：NFκB和Stat3信号途径在胃癌组织和细胞系中的活化临床医学 Abstract： Objective To illustrate the activation status of NFκB, Stat3 signalings and their correlatio with gastric Immunohistochemistry, RTPCR and western blotting were adopted to detect NFκB and Stat3 signaling activatio in the gastric cancer tissues and cell lines. Results Expressio of NFκB and Stat3 were significantly higher in the cancer tissues compared with premalignant tissues (P). Conclusion Conclusion NFκB and Stat3 signalings were activated in gastric cancer tissues and associated with gastric carcinogenesis. Key words： gastric neoplasm; NFκB; Stat3; signaling 胃癌是世界范围内发病率和死亡率较高的恶性肿瘤之一，其确切的发病机制还不十分清楚[1]，目前认为是多因素参与的多阶段、多步骤、涉及多种基因改变的共同作用结果。因此研究胃癌发生、发展的分子生物学机制对于预防乃至选择合理的 治疗 策略都有着重要的意义。本研究对胃癌组织中NFκB和Stat3信号通路的活化状态进行探讨。 1 材料与方法 材料 （1）标本来源和细胞系来源：54例胃癌及癌旁组织均选自大连医科大学辽宁省癌症基因组学重点实验室建立的人胃癌组织库。胃癌细胞系AGS和HGC27购于美国ATCC（American Type Cell Culture）细胞库。MGC803（人胃低分化黏液癌）和BGC823（人胃低分化癌）从北京肿瘤研究所购进。（2）抗体：鼠单克隆NFκB抗体（MSC8008，Cell Science，Sydney, Australia），兔多克隆Stat3抗体（Santa Cruz，CA， USA） 方法 （1）石蜡组织微阵列的制作：石蜡组织微阵列采用自制的阵列制作仪制作。（2）免疫组化染色：免疫组化试剂盒：HistostainTMplus Kits SP9003(山羊SP Kit)、SP9000（通用SP Kit）购自北京中山生物技术有限公司；按照SP试剂盒说明进行免疫组化染色。结果的判定按 文献 [2]进行。（3）细胞培养：①MGC803和BGC823细胞培养液：DMEM培养基，10%胎牛血清。②AGS及HGC27细胞培养液：Ham’s F12培养液， 10%胎牛血清，根据美国ATCC推荐[3～4]。在细胞培养箱中培养细胞至80%汇合时收集细胞，提取RNA和蛋白用于实验分析。（4）RNA提取和RTPCR分析：常规Trizol法提取总RNA。反转录体系依照TaKaRa RNA LA PCRTM Kit试剂盒提供说明书进行操作，PCR引物序列（TaKaRa生物工程有限公司）见 参考 文献[5～7]。（5）胃癌细胞系总蛋白的提取及Western印迹分析：常规提取细胞总蛋白。Western印迹分析参照文献[8]方法进行。 统计学方法 使用版本统计软件，选用KruskalWallis检验方法。 2 结果 NFκB和Stat3在不同病变胃组织中的表达 见表1，图1。 表1 NFκB和Stat3在不同病变胃组织中的表达（略） 与癌前病变组比较，①P 图1 NFκB和Stat3在不同病变胃组织中的免疫组织化学染色结果（略） NFκB在慢性萎缩性胃炎和肠上皮化生中的阳性表达率均较低，分别为20%（3/15）和%（2/8），两