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牛黄解毒片中黄芩苷的含量测定方案 一、设计背景 牛黄解毒片是必备的居家药品，是清热解毒中成药的代表。它由牛黄、雄黄、 石膏 、大黄 、黄芩 、桔梗、冰片和甘草组成，具有清热解毒的作用，用于火热 内盛 、咽喉和牙龈肿痛 、口舌 生疮等症，可以治疗各种因为上火引起的疾病和症状，例如：牙龈肿痛，咽喉肿痛，发炎等症状，疗效都是显著。 基于《中国药典》关于黄芩苷的记载，黄芩苷（别名黄金茶）是属于黄酮类化学物，是属于黄色晶体（熔点为223℃），无臭，味苦。黄芩苷的含量越高可以更好的提升牛黄解毒片药性。 二、设计依据 经查阅相关的期刊文献资料及《中国药典》（2020年版）得知，目前，可用于黄岑苷含量测定方法主要有紫外-可见分光光度法和高效液色谱法等。在研究中发现，紫外-可见分光光度法专属性较差，只适合用于测定稀溶液，制剂中的辅料对其测定的干扰较大，样品处理麻烦，仪器操作较复杂，测量结果不够准确。而高效液相色谱法具有操作简单、分离效果好、检测快速、分析精密度高、结果准确度好等优点，适合测定制剂中的有效成分的含量，资料中有关采用高效液相色谱法测定制剂中主要成分含量的文献较多。 本方案拟采用高效液相色谱法对牛黄解毒片中黄岑苷的含量进行测定，同时为今后的学习和研究奠定理论和实践上的基础。方案中利用实验的方式，结合高效色谱法试品溶液进行检测，并通过相应的检测结果测定牛黄解毒片中黄芩苷的含量。 三、设计方案 （一）仪器与试药 1.仪器 惠普1100高效色谱仪（厂家：惠普，型号：1100）； Hangpinc-FA2004N型电子天平（厂家：步青科技有限公司）。 2.试剂试药 黄芩苷对照品由中国药品生物制品检定所提供（纯度100．00％）； 乙醇和磷酸为分析纯，甲醇为色谱纯，水为超纯水。 牛黄解毒片选用广西日田药业集团有限责任公司提供。为测试牛黄解毒片中黄芩苷的含量，该试剂去除糖衣后（呈棕黄色）并进行测定，对药剂进行提取并进行高效色谱法样品溶液检测。 （二）测定方法 1.检测条件 （1）流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（55:45） （2）检测波长：275mm （3）柱温：25℃ （4）色谱柱：迪马钻石C18（4.6mm×200mm，5μm） （5）流速：1.0ml·min-1 （6）进样体积：10μm 2.溶液的制备 （1）对照品溶液的配制 精密称取黄芩苷对照品10mg，置10ml量瓶中，加入甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，超声震荡溶解，制成每1ml含1mg的溶液，摇匀，作为储备液；精密移取储备液适量，加甲醇制成每1ml含30μg溶液，摇匀，作为对照品溶液。 （2）供试品溶液的配制 取牛黄解毒片20片（包衣片除去包衣），精密称定，研细，取约1g，精密称定， 加入70%的乙醇30ml，超声处理20min，放冷过滤后，滤液至20ml量瓶中，再用少量70%乙醇分别洗涤溶液器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加入70%乙醇直至刻度，摇匀，即得供试品溶液。 3.方法学考察 （1）专属性试验 取牛黄解毒片药材粉末适量，加甲醇超声处理（功率 300W，频率 25kHz） 50 分钟，滤过，取续滤液，按检测条件进行色谱分析，在黄岑苷峰位处无吸收。 （2）线性关系考察 精密量取黄岑苷对照品储备溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2,1.6mL，置于10ml容量瓶中，配制成浓度为0.02,0.04,0.06,0.08,0.10,0.12,0.16mg/mL的黄岑苷对照品溶液。按照高效液相色谱法，进样体积为20μL，每种浓度的溶液连续进样三次，记录峰面积。以峰面积（A）为纵坐标，对照品浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线。写出线性回归方程及相关系数r。根据回归方程，判断线性关系是否良好，相关系数应大于0.990。 （3）精密度试验 取0.9ml的标准品储备液,置于10ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度。每次进样20μL,连续进样5次，测定峰面积,峰面积 RSD 应小于 1.5%。 （4）回收率试验 精密称取牛黄解毒片细粉六份分别置于六个50 mL容量瓶中，加入黄芩苷对照品适量，加50％甲醇溶液少许超声30 min，再加50％甲醇溶液稀释至刻度线摇匀，过滤，精密量取10uL注入液相色谱仪，计算回收率。 （5）重复性试验 精密称取牛黄解毒片细粉(包衣片除去包衣) 6份,按“供试品溶液的配制”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件进行测定，峰面积RSD值应小于5.0%。 （6）稳定性试验 精密称取牛黄解毒片细粉(包衣片除去包衣),按“供试品溶液的配制”项下方法制备供试品溶液,室温下放置，分别在0,2,4,8,12,24h进样,测定黄芩苷峰面积,若峰面积RSD值小于5.0%，则表明供试品溶液在24h内稳定。 4.样品含量测定 按供试品制备方法，按上述色谱条件进样，分别精密吸取对照品溶液与