第五组利用基因工程酵母生产抗疟疾药物前体青蒿酸.pptVIP

　　a-c．每一种酶的测定分别加入（a）10μM amorphadiene，（b）25μM 青蒿醇（c）25μM 青蒿醛。　　底物的色谱峰用星号标出。醚提取物经过衍生，并用GC-MS在不同的粒子模式下分析（mlz：121，189，204，218，220和248）。酶反应的产物按照预期得到：1，青蒿醇（保留时间13.20分钟）；2，青蒿醛（保留时间11.79分钟）；3，青蒿酸（保留时间13.58分钟，甲酯化后检测） 微生物发酵工程案例教学* 第三十一页，共四十七页。 　　　　虽然先前已经有报道，使用青蒿蛋白提取物的体外酶法测定证明可溶性的醇醛脱氢酶和一种C11，13双键还原酶（作用于醛）参与青蒿素的生物合成 。我们不排除在青蒿中存在其他的醇醛脱氢酶参与的催化反应，但是体外实验中重组的CYP71AV1将amorpha-4, 11-diene高效转化为青蒿酸，完全显示出膜结合、多功能的CYP71A　V1是青蒿素的生物合成中的关键促成因素。 微生物发酵工程案例教学* 第三十二页，共四十七页。 　　我们证实，通过用碱性缓冲液（pH为9的Tris-HCL缓冲液中添加1.2M的山梨醇）清洗胞体沉淀物，绝大部分合成的青蒿酸（96%）可以而被分离出，而且冲洗之后细胞体和培养基中的残留量仅为2%。青蒿酸不仅可以被高效的转移到细胞外，且在酸性条件下经过质子化后会被束缚在细胞表面。 五