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分子生物学技术在燕窝基因检测方面的应用探究
文档信息
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目录
TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1
正文 1
文1:分子生物学技术在燕窝基因检测方面的应用探究 2
1 PCR技术及其在燕窝检测中的运用 2
2 DNA指纹技术 3
3 基因芯片技术 5
文2:分子生物学技术在检验检疫中的应用 6
一、资料与方法 7
(一)一般资料 7
(二)方法 7
(三)观察指标 7
(四)统计学分析 7
二、结果 8
三、讨论 8
参考文摘引言: 10
原创性声明(模板) 11
文章致谢(模板) 11
正文
分子生物学技术在燕窝基因检测方面的应用探究
文1:分子生物学技术在燕窝基因检测方面的应用探究
基因是生物遗传信息的载体,以脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,DNA)的形式存在于所有组织和细胞中。遗传信息直接决定了生物体的本质,所以,通过基因对生物物种进行鉴别是权威和科学的方法。随着生物学的发展,快速、准确分析基因信息的技术方法不断出现,如聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、实时荧光PCR、分子指纹、基因芯片、基因测序等。由于分子生物学检测方法具有特异性好、灵敏度高以及方便快捷等优势,因此在真伪鉴别中也得到了运用。
燕窝作为一种唾液和绒羽的混合物,其唾液中口腔上皮细胞和绒羽的构成细胞,可提供相关的生物信息。燕窝中糖蛋白存在的主要形式是粘蛋白,不易分离,黄秀丽等[1]利用液相等点聚焦电泳,使燕窝水提蛋白质以及丙酮沉淀蛋白质无杂质干扰,满足电泳分析的需要。同时,黄秀丽课题组研究燕窝中的蛋白质样品制备的方法,发现80%丙酮作为蛋白沉淀剂不仅能有效去除杂质,而且分离效果更佳。林洁茹等[2]将SDS应用于燕窝中蛋白质分离,并应用等点聚焦电泳实现燕窝真伪识别。郭丽丽等[3]将双向电泳技术用于燕窝中水溶性蛋白的分离和鉴定。研究人员利用不同的方法对燕窝及其制品进行DNA提取,建立了有效快速的DNA提取方法,为生物方法用于燕窝真伪测定的发展提供依据。
1 PCR技术及其在燕窝检测中的运用
PCR技术是一种体外核酸扩增技术,以待扩增的两条DNA链为模板,在1对人工合成的寡核苷酸引物的介导下,通过耐高温DNA聚合酶的酶促作用,快速特异地扩增出特定的DNA片段。随着科技的发展,研究人员将PCR技术大量改进,由此产生了一系列相关PCR技术方法,其中包括原位PCR、巢式PCR、反向PCR、锚定PCR、多重PCR、不对称PCR、重PCR、标记PCR、免疫PCR等主要用于定性检测的技术。1996年,实时荧光PCR技术的诞生,PCR技术实现了从定性到定量的飞跃。实时荧光PCR技术通过在反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号监测PCR反应过程,然后根据标准曲线对未知模板进行定量。
何国林等[4]设计1条具有良好特异性和灵敏度的特异靶向雨燕属和金丝燕属细胞色素基因的Taq Man探针,结合实时荧光PCR技术对燕窝样品进行检测分析;Lin等[5]建立了以线粒体细胞色素b基因为靶标的燕窝遗传学分子鉴定方法。通过对11个燕窝样品中线粒体细胞色素b基因的PCR扩增、测序及序列比对、聚类分析后,发现该方法能够将燕窝来源区分开,同时认为该方法具有用于燕窝真伪鉴定的可能性。实时荧光PCR法以及双向电泳法作为燕窝测定的行业标准得到广泛应用,作为分子生物学鉴定方法可以准确地检测燕窝成分;Wu[6]等将PCR技术和双向凝胶电泳技术应用于真伪辨别中。PCR技术主要用于评价产品中燕窝成分的存在,灵敏度比较高,可检测%燕窝含量的银耳燕窝类加工制品,而双向凝胶电泳则可确定燕窝蛋白占总蛋白的比例;王凤云等[7]探究了32种不同品种和产地燕窝的生物基原,对其中的DNA进行提取、扩增和测序后,利用MEGA 软件进行序列比对,分析变异位点,计算Kimura-2参数遗传距离,构建邻接(NJ)系统发育树,从而鉴别燕窝的基原。结果表明,NJ系统发育树显示相同生物基原的燕窝物种将聚为1支,其所建立的实时荧光定量PCR检测方法具有良好的特异性、灵敏性、重复性和稳定性等特点。
2 DNA指纹技术
DNA指纹技术建立在DNA分子标记基础上,以生物个体间核苷酸序列变异为基础的遗传标记(分子标记),直接在DNA水平上检测生物个体的差异,是生物个体在DNA水平上遗传变异的直接反映。DNA分子指纹技术种类繁多,包括限制性片段长度多态性(Restriction Fragmen
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