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非洲猪瘟病毒实验室PCR检测方案设计 1.毕业设计思路 本人在校期间曾参加过学院社会组织的非洲猪瘟防治科普活动，对非洲猪瘟有一定了解，实习期间在湖南天心种业公司管理实验室进行企业实习，又掌握了一些非洲猪瘟病毒实验室安全诊断的技术。想到近两年非洲猪瘟病毒在我国肆虐发展，对我国产生的严重社会和经济影响，给我国生猪养殖企业带来的损失，希望我们不断通过普及一些非洲猪瘟的基本现实信息及非洲猪瘟病毒实验室安全检测数据技术，能对人民群众认识和了解非洲猪瘟有一定的帮助，以及对有想发展生猪养殖的企业文化进行分析非洲猪瘟的防范和诊断有参考帮助。 2.基本概念和理论基础 2.1 非洲猪瘟 2.1.1 定义 非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒造成的一种急性、烈性、出血性、高传染性动物疾病。简称ASFV。只有猪会染上该病，如果在猪群里犯病，死亡率可高达 100％。我国把此病划为重点防范的一类动物系疾病，世界动物卫生机构（OIE）将其排定为 A 类动物疫病。 2.1.2 起源 初次报导发生该病是在肯尼亚，撒哈拉南部的非洲区域持续有此病的报导，1957年散播到西欧和拉美地区，尽管多数被实时歼灭，但西方大多地区仍有盛行。 21世纪初期，非洲猪瘟在全世界许多国度出现、传播、盛行，尤其在俄罗斯和其周边地域。2017年的3月，俄罗斯东部区域发生了非瘟疫情，疫情产生地在中国间隔仅为一千公里左右；况且，中国是生猪养殖和猪肉消耗大国，毛猪的出栏数、在栏数以及猪肉消耗量都位居全球第一，历年活猪和其猪肉制品进口总量庞大，与大多国度的贸易交往繁多；并且，我国与他国旅游来往也十分的兴盛，游客们随带的商品总量多、品种复杂。所以，非洲猪瘟进入本国的可能日渐发展加大。如果传染，造成的影响和损失将会无法计算。 二十世纪早期肯尼亚初次确定非洲猪瘟疫情，二十世纪中期散播到欧洲地域，二十世纪晚期传入西班牙，2018年中国首度确定疫情，横穿百年，ASFV有近百年的流行史，是一个世界级的难事。 2.1.3 流行病学 易感动物 猪与野猪，不感染其他动物和人。 传播媒介 来自非洲地区和西班牙地域的一些蜱是其的贮存宿主和散播介质。往往来说，ASFV散播到没有疫病的地域进行发展一般都是国际交通枢纽地带的没有经煮熟过的受感染的猪制品和餐厨残羹等剩余物喂猪有关，以及人们碰触已经染病的家猪的污秽物、幼体、排泄物、机体组织等，喂养受污秽的草料造成传染。染疫猪或带毒物跟健康猪接触是非洲猪瘟最关键的传播方式，没有得病的猪也有可能被携毒的蜱等虫子叮咬而患上疫病。 传播途经 未曾发病地域传播疫病的途经通常分为四大类：一、国际贸易和走私生猪及产品；二、旅行的乘客随带的猪肉及其制品；三、国际交通工具上的厨房垃圾；四、野猪的迁徙。 2.2 非洲猪瘟在我国的影响 中国和产生疫病国家文化交流、商品交易往来繁多；和周边的国家相比我国猪肉价格较高，走私活动也是层出不断、持续开展；边境区域野猪群体持续增加，由此比他国散入疫情的可能更大。而非洲猪瘟又是一种高传染性的动物疾病，自确诊首例非洲猪瘟疫情后，我国的农业农村部就对疫情进行了流行学调查，在2018年11月消息发布会上说明在我国的散播方式主要有三类：一是生猪及其产品跨地区调运。二是厨房垃圾喂猪。三是职员和车子带毒流动散播。 本国自从出现第一起非洲猪瘟疫情后，31个省份相继出现疫情，多地报告了疫情的扑杀情况，受到非洲猪瘟疫情的直接和间接作用，我国活猪在栏量和繁殖母猪在栏量都明显地减少，生猪、猪肉及其相关产业产品出现了供求紧张局面，给我国的生猪企业带来极大的经济损失，每个养殖户承受巨大压力，我国生猪标价也一路持续增长。 我国是生猪养殖和消费主义大国，猪肉在肉类消费中属于刚性需求消费，生猪产业是我国企业中重要畜牧文化产业之一。在目前没有能够有效治疗的药物和预防疫苗的情况下，需要依靠生物安全措施，使防控在防范非洲猪瘟中成为重中之重。减少自我企业损失、维持盈利和环保压力的双重要求下，许多的生猪养猪企业都需要转向升级，提高生物安全水平。 2.3 非洲猪瘟病毒（ASFV） 非洲猪瘟病毒是其独一分子，据有类似 虹彩病毒科和痘病毒科的一些特征。病毒大小为175－215nm，呈现20面体匀称结构，外层有囊膜。DNA为双链线状，全基因组大小为170－190kb。该病毒能够在蜱中繁殖，变为重要散播媒介。 该病毒可以从染疫猪的血液、器官、粪便、尿液中来确认染疫情况，病毒处于昏暗寒冷湿润的环境内血液中可以长存六年，在温室环境中也可以生存数月；但是该病毒不耐热，受热病毒感染的血液55摄氏度半小时或60摄氏度一刻钟，可以将其杀死，还有许多消毒药都可以将其销毁。 3.非洲猪瘟病毒实验室PCR检测方案设计 3.1 荧光定量PCR检测技术 3.1.1 定义 利用荧光染料或荧光记录具有特异性的探针，对其产物实时记录和跟随，