蛋白质组与蛋白质组学.pptVIP

关于蛋白质组与蛋白质组学;蛋白质组学;蛋白质组与蛋白质组学的定义;蛋白质组学 旨在阐明生物体全部蛋白质的表达模式与功能模式 从整体的角度分析、鉴定细胞内动态变化的蛋白质的组成、结构、性质、表达水平与修饰状态,了解蛋白质之间、蛋白质与大分子之间的相互作用与联系,揭示蛋白质的功能与细胞生命活动的规律;蛋白质组及其质点的分离与分析; 根据蛋白质溶解度、分子大小及形状、电离性 质、生物学功能的差异进行： 1、根据溶解度 2、根据分子量 透析和超滤 平衡离心 凝胶过滤层析 ;第7页，共49页，2022年，5月20日，7点52分，星期六;第8页，共49页，2022年，5月20日，7点52分，星期六;3 、根据电荷 毛细管电泳 离子交换层析;4 、根据蛋白质的亲和能力 亲和层析 ;（四） 蛋白质分离纯化的条件;二、分析鉴定;Western免疫印迹;常需要内参蛋白量化蛋白量； GAPDH、ACTIN、ALBUMIN… …; 将SDS的高分辨能力与抗原抗体反应的特 异性、敏感性相结合 (灵敏度达到ng级) 蛋白电泳在变性条件下进行，消除了蛋白溶解、 聚集以及与外来蛋白共沉淀等问题;免疫荧光法(immunofluorescence);免疫荧光法(immunofluorescence);免疫沉淀(immunoprecipitation)技术;免疫共沉淀 (co-IP)技术;（二）二维凝胶电泳（2-DE);二维双向电泳(2D electrophoresis);2-DE原理示意图;2-DE分析的基本步骤;2-DE获得的蛋白质图谱;优点：可以同时直观显示数千个蛋白质点； 缺点：耗时，耗力，目前无法自动化；难以分离疏水、具极端分子量 或等电点的蛋白质（如膜受体蛋白、组蛋白等）。;蛋白质染色; 通过2-DE得到的蛋白质分离图谱，需要经过摄像或扫描转换为以像素为基础的、具有不同灰度强弱和一定边界方向的斑点电脑信号。 ; 2-DE图像分析软件包操作过程： ; 放射性核素标记亲和标签法 ;蛋白芯片(protein chip)技术;蛋白芯片(protein chip)技术;蛋白芯片(protein chip) 技术;蛋白芯片(protein chip) 技术;蛋白质芯片;原理 样品分子离子化后，根据不同离子间的质量?? 电荷比值（质荷比，m/e）的差异确定分子量。 应用 蛋白质的序列分析 研究蛋白质的修饰;（六） 其它方法;蛋白质数据库及其应用;蛋白质数据库及其应用;一、蛋白质数据库;一、蛋白质数据库; 蛋白质数据仓库 蛋白质结构分类数据库 PROSITE数据库 ; （三）蛋白质直系同源簇（COGs)数据库 （四）DIP数据库(DIP Database) ;二、蛋白质数据库的应用;第44页，共49页，2022年，5月20日，7点52分，星期六;第45页，共49页，2022年，5月20日，7点52分，星期六;第46页，共49页，2022年，5月20日，7点52分，星期六;第47页，共49页，2022年，5月20日，7点52分，星期六;第48页，共49页，2022年，5月20日，7点52分，星期六;感谢大家观看