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果蔬中可溶性蛋白质含量的测定 果蔬可溶性蛋白质含量 （Soluble protein content ）是一个重要的生理生化指 标，也是果蔬品质和营养的重要评价指标之一。许多可溶性蛋白质是构成果蔬中 酶的重要组成部分，参与果蔬多种生理生化代谢过程的调控，与果蔬的生长发育、 成熟衰老，抗病性、抗逆性密切相关。此外，在研究每一种酶的作用时常以比活 力 （酶活力单位/毫克蛋白质，Unit/mg Protein)表示酶活力大小及酶制剂纯度。因 此，就需要经常测定可溶性蛋白质的含量。 测 I ．考马斯亮蓝染色法 检 一、目的要求 了解考马斯亮蓝染色法测定果蔬组织中可溶性蛋白质含量的原理，掌握测定 质 方法。 二、基本原理 液G-250 Coomassie brilliant blue G-250 - 考马斯亮蓝 （ ）法是利用蛋白质 染料结 合的原理，定量测定微量蛋白质浓度的方法。该燃料在游离状态下呈红色，在稀 测465 nm 酸溶液中当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者最大吸光在 ，后 海 595 nm 1~ 1 000 µg 者在 。在一定的蛋白质浓度范围 （ ）内，蛋白质与该染料结合 物在 595 nm 波长下的吸光度值与蛋白质含量成正比，符合比尔定律，故可用于 上 检 蛋白质的定量测定。 考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合反应十分迅速，2 min 左右即达到平衡。其 1 h 质 结合物在室温下 内保持稳定。该反应快速灵敏、易于操作、干扰物质少 （考 马斯亮蓝 G-250 和蛋白质通过范德华力结合，受蛋白质的特异性影响较小，除组 蛋白外，其他不同种类蛋白质染色强度差异不大），可测定微克级蛋白质含量， 液 是一种比较好的蛋白质定量法。但此方法也存在缺点，考马斯亮蓝在蛋白质含量 很高时线性关系偏低，且不同来源蛋白质与染料结合状况有差异。 测 海 三、材料、仪器及试剂 （一）材料 检 各种水果和蔬菜。 上 （二）仪器及用具 质 离心机、分光光度计、移液器、研钵、离心管、旋涡混合器、烧杯、容量瓶 1 000 mL 100 mL 20 mL （ ， ）、具塞刻度试管 （ ）。 （三）试剂 液 1 100 µg/mL ．标准蛋白质溶液 （ 牛血清蛋白质）