共价有机骨架功能材料及其在糖肽选择性富集中的应用.docxVIP

共价有机骨架功能材料及其在糖肽选择性富集中的应用 共价有机骨架材料(covalent organic frameworks,简称COFs)是有机单体通过共价键结合构成的一种新型的有序结晶聚合物。作为一种具有周期性网络结构的有机多孔材料,COFs不仅具有多样的孔洞结构和大的比表面积,以及优异的隔音性、隔热性和渗透性,而且具有更加均一的孔洞尺寸与稳定的结构构型,可进行合理的设计和组装。在其骨架上通过各种化学反应接枝上许多功能基团,可大大提升材料功能的多样性。目前,COFs材料吸引了众多研究者的兴趣,设计及合成了越来越多的COFs材料,研究主要集中在合成不同连接方式和不同单体组成的COFs材料,以及COFs材料功能化修饰等方面。 继基因组学之后,蛋白质组学成为新的研究热点。作为生命活动的主要承担者,蛋白质的多种翻译后修饰(糖基化、磷酸化、甲基化、泛素化修饰等)参与或者调控生物体内重要的生理、病理过程,并在人体不同的健康状况或生长时期发生改变[8-10]。其中,蛋白质的糖基化修饰是上述几种修饰蛋白质中最常见、最重要的翻译后修饰之一[11,12]。糖蛋白组学研究有几个任务,分别为发生糖基化的蛋白质的鉴定、糖肽结构的解析、糖基化位点的鉴定和研究糖基化对蛋白质功能的影响[13-16]。生物质谱技术的发展使人们能在分子水平上进行糖蛋白或糖肽的有效监测[17,18]。但是,和其他蛋白质相比,糖蛋白的数量较低,酶解后的糖肽丰度就更低了,因此,需要一些手段对糖肽进行有效的富集,以提高其检测丰度[19-22]。开发新的富集方法和富集材料是糖蛋白组学领域的研究热点[23-30]。 COFs有序坚固的框架孔道结构,提供了作为糖肽富集材料载体的条件,同时基于载体骨架结构的功能化修饰也将大大提升糖肽富集分离效率[31-34]。Zhang课题组[35]将一种新型COF功能化的磁性石墨烯复合物(MagG@COF-5)作为超敏感基质用于识别糖肽,通过LC-MS/MS分析,成功地检测到了232个独特的N-连接糖肽和85个特征糖蛋白。N-连接糖肽已被证明是治疗各种疾病的关键生物标志物,Zhang课题组[36]研究出的还原型谷胱甘肽功能化银纳米粒子修饰COFs材料应用于N-连接糖肽的富集研究中,提高了COFs的富集选择性,并提供了一种新的方法。Wu课题组[37]使用磁性胶体纳米晶体簇(MCNC)作为核心,利用后修饰策略制备了另一种谷胱甘肽功能化的高亲水性磁性COFs,用于人唾液中内源性N-连接糖肽的富集,同样表现出优异的糖肽富集性能,如高灵敏度及选择性、良好的尺寸排阻效应和可重复使用性等。但目前将结构修饰功能化的COFs材料应用于糖蛋白组学的研究还在起步阶段,相关研究较少,也存在糖肽选择性不足、相互特异性作用不强等问题。 本文以开发新的糖肽富集材料为目的,结合COFs材料的功能化修饰,以2,5-二甲氧基苯-1,4-二甲醛(DMTA)和1,3,5-三(4-氨苯基)苯(TAPB)为单体,通过溶剂热法,首先制备得T-D-COF,再用亚氯酸钠溶液进行氧化,发展出一种新的材料O-T-D-COF。将该材料进行糖肽的富集应用,在复杂体系验证富集选择性,以及考察富集检测限、富集容量和回收率。基于COFs功能化修饰的新材料,有望为开发糖肽富集新材料提供新的思路,为糖蛋白组学提供了一种选择性更优、可控性更好的糖肽富集新思路。 1 实验部分 1.1 仪器、试剂与材料 TAPB、DMTA、正丁醇、邻二氯苯、冰醋酸、碳酸氢铵、尿素购自麦克林生化科技有限公司(中国上海)。甲醇购自国药集团化学试剂有限公司(中国上海)。四氢呋喃、硼氢化钠、乙腈(ACN)、三氟乙酸(TFA)购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司(中国上海)。人血清免疫球蛋白G(IgG)、牛血清白蛋白(BSA)、二硫苏糖醇(DTT)、碘代乙酰胺(IAA)、胰蛋白酶、N-糖苷酶F(包含Glycobuffer)、2,5-二羟基苯甲酸(DHB)购自Sigma-Aldrich(美国)。此外,实验用水为Milli-Q超纯水系统(美国Millipore公司)制备的超纯水。人血清样本采集自健康人,按照标准临床程序从上海交通大学附属第六人民医院获得。 扫描电子显微镜(SEM)的型号为S-3400N (Hitachi,日本),透射电子显微镜(TEM)的型号为JEOL JEM-1400(JEOL,日本),固体核磁测试采用500MHz核磁共振波谱仪(Bruker,瑞士),红外光谱采用全反射傅立叶红外光谱仪(ATR-FTIR)型号为Nicolet 6700 (Thermo Scientific,美国)。 1.2?COFs的制备 称取TAPB 0.526 g(1.5 mmol),装于50 mL三口烧瓶中;量取10 mL邻二氯苯和10 mL正丁醇,混合均匀后加入到三口