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基因工程药物改造
-构建突变体
课前思考
如何获得并生产符合预期要求的蛋白质？
可否像定制商品一样，从源头定制生产蛋白质？
学习目标
理解并识记基因定点突变技术内容
了解用于实际生产使用的定点突变技术
寡核苷酸介导的基因突变
缺失
Kunkel法（U法）
含有两种酶的菌株
盒式定点突变法
又称为片段取代突变
适用情况：
突变位点两端有成对酶切位点
基于PCR反应的突变
基因的5’和3’末端产生突变
重叠延伸PCR
大引物PCR
白介素-2定点突变改造
133个氨基酸残基组成
58位和105位的半胱氨酸之间会形成一个比较稳定的二硫键
125位半胱氨酸呈现游离状态，容易形成错误的二硫键配对或者形成同源二聚体
在实际生产中使用基因定点突变的方法，把第125位的半胱氨酸改成丝氨酸或者是丙氨酸，突变后的生物活性是野生型的两倍，稳定性提高
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