四价流感病毒裂解疫苗安全性和有效性试验.docxVIP

四价流感病毒裂解疫苗安全性和有效性试验 目前，市场上的三价流感病毒烷基苯乙烯（tiv）只有一种b型毒株。由于预测不准确，可能导致b型预测板与流行板不一致，今年的b型毒株保护率降低。 1 材料和方法 1.1 流感病毒种及成品 毒株A1:NIBRG-121XP;A3:NYMC X-223A;B1 (Yamagata系) :Massachusetts/2/2012;B2 (Victoria系) :NIB-58。以上菌株均购自英国国家生物标准与检定所 (National Institute for Biological Standards and Control, NIBSC) 。 由浙江天元生物药业有限公司按该公司“四价流感病毒裂解疫苗制造和检定规程”, 用A1、A3、B1、B2型毒株制备的工作种子批分别制备各型原液, 批号分别为A1201504028B、A3201506012B、B201506004B、SB201508001B;配制半成品批号为S201509001, 规格0.5 m L/支, 含流感病毒株血凝素为15μg/型, 经全面检定合格后即为QIV成品, 成品批号为S201509001。TIV对照苗为该公司已上市销售疫苗, 规格0.5 m L/支, 含流感病毒株血凝素为15μg/型, 批号为201507016。 1.2 出现的样品 A1抗原标准品 (09/196) 、A3抗原标准品 (13/116) 、B1抗原标准品 (13/134) 、B2抗原标准品 (08/352) 、A1血清标准品 (12/108) 、A3血清标准品 (13/110) 、B1血清标准品 (10/146) 、B2血清标准品 (13/114) 均购自NIBSC。 1.3 物科技有限公司 毒理试验用动物:SPF级SD大鼠购自台湾乐斯科生物科技股份有限公司;SPF级新西兰兔购自青岛康大生物科技有限公司;豚鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。免疫原性试验用动物:普通级新西兰兔购自北京金牧阳实验动物养殖有限责任公司;SPF级雄性健康Balb/c小鼠 (6~8周龄, 平均体重18~22 g) 购自斯贝福 (北京) 实验动物科技有限公司。所有实验动物在接种疫苗前均未检测出相关流感抗体。 1.4 红细胞蛋白和受体 磷酸缓冲液 (阴性对照品) 购自Gibco by life technologies公司;火鸡红细胞 (用PBS洗涤3次, 离心, 弃去上清液后的红细胞即为浓红细胞, 用PBS稀释成1%浓度, 即为实验用鸡红细胞) , 火鸡血采自北京芳元缘养殖场火鸡;受体破坏酶购自日本SEIKEN公司;海兰白鸡胚购自杭州蛋鸡场。全自动接种机和全自动收获机均购自美国RAME-HART公司;区带离心机购自日立公司;高效液相层析系统 (High Performance Liquid Chromatography, HPLC) 购自Waters公司。 1.5 成品检定 按企业质量标准对原液、半成品及成品进行全面检定, 并将成品送中国食品药品检定研究院 (National Institutes for Food and Drug Control, NIFDC) 进行全面检定。 1.6 中毒试验 1.6.1 qv的注射 SPF级SD大鼠雄性和雌性各10只, 随机分成2组 (QIV试验组和生理盐水对照组) , 注射体积为0.5 m L, 分两处 (左后肢和右后肢) 进行注射, 每个注射位点0.25 m L, 检测其潜在的毒性。 1.6.2 数据的充分发挥 SPF级新西兰兔雌雄各3只, 单次注射, 分别在左后腿给予0.5 m L QIV, 右后腿给予0.5 m L TIV, 检测其潜在的肌肉刺激性, 并通过14 d恢复期观察, 评估其对肌肉刺激的可逆性。 1.6.3 给药开始时体重 7周龄大鼠雌雄各40只, 被随机分成2组 (QIV实验组和生理盐水对照组) , 每组雌雄各20只。给药开始时体重:雌性181.87~226.75 g, 雄性241.51~279.42 g。通过肌肉注射给药, 于第1天和第15天分两处 (左后肢和右后肢) 进行注射, 每个位点0.25 m L, 检测其潜在的毒性。 1.6.4 肌肉注射和静脉激发阶段 豚鼠雌雄各9只, 随机分成3组 (生理盐水阴性对照组、卵清白蛋白阳性对照组和QIV供试品组) , 观察包括供试品、对照品的全身致敏情况。 给药持续时间包括以下两个阶段。肌肉注射诱导阶段:3组动物分别于第1、3、5天每天一次经肌肉注射供试品、阴性对照品及阳性对照品。注射位点为两个, 分别在左后肢和右后肢, 每个位点各0.25m L。静脉注射激发阶段:在第19天 (末次诱导给药后第14天) , 对豚鼠静脉注射阴性对照品和供试品进行激发, 激发剂量是诱导剂量的两倍;在第