注射用右旋雷贝拉唑钠遗传毒性评价.docxVIP

注射用右旋雷贝拉唑钠遗传毒性评价 质子泵抑制剂是目前最有效的胃肠道分泌物抑制剂，广泛应用于胃食管反流和慢性溃疡的治疗。 1 材料和方法 1.1 蘑菇 TA98、TA100、TA1535、TA97a和TA102购自美国Molecular Toxicology,Inc。 1.2 细胞植物 中国仓鼠肺细胞（CHL）购自中国科学院上海生命科学研究院。 1.3 温度和湿度试验 昆明小鼠50只，SPF级，体重30～40 g，雄性，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，试验在屏障环境动物实验设施内进行，控制环境温度为20～26℃，湿度为40%～70%。 1.4 培养基和试剂 注射用右旋雷贝拉唑钠，由山东省药学科学院提供；4-硝基喹啉-N-氧化物、2-氨基芴、1,8-二羟基蒽醌、环磷酰胺均购自Sigma；丝裂霉素C购自Roche；叠氮钠购自山东西亚化学股份有限公司；RPMI Medium 1640 basic培养基购自Gibco；新生牛血清购自浙江天杭生物科技有限公司；肝微粒体酶（S9）购自美国Molecular Toxicology,Inc。 1.5 hfsafe-400te生物安全柜 AUW120D电子分析天平，日本岛津有限公司；SPX-250B-Z生化培养箱，上海博迅实业有限公司医疗设备厂；HFsafe-1500TE生物安全柜，上海力申科学仪器有限公司；Thermo 3111二氧化碳细胞培养箱，Thermo scientific公司；E100尼康显微镜，Nikon公司。 1.6 测试方法 1.6.1 菌株鉴定方法 采用《药物遗传毒性研究技术指导原则》中推荐的5种菌株组合：TA98、TA100、TA1535、TA97a和TA102，对5株菌株分别进行组氨酸缺陷型（his）鉴定、脂多糖屏障缺陷（rfa）鉴定、uvrB修复缺陷型鉴定、R因子鉴定、四环素抗性鉴定、自发回变鉴定、对阳性致突变物反应性测定 1.6.2 体格检测 CHL核型检查，畸变率5%，荧光显微镜检查无支原体污染 1.6.3 立溶媒对照组、阳性对照环磷酰胺，5.5% 受试物高、中、低剂量分别为103、52、26 mg/kg，同时设立溶媒对照组、阳性对照组（环磷酰胺，50 mg/kg）。溶媒对照组、受试物各剂量组静脉注射给予相应给药制剂，阳性对照组腹腔注射给药，各组均单次给药，给药24～48 h采样2次取胸骨制备骨髓涂片 1.6.4 处理数据 试验数据进行平均数和标准差的计算，以均值±标准差（ 2 结果 2.1 右旋雷拉德唑钠单次给药对小鼠体内细菌的抑菌作用 本试验中，在代谢活化和非代谢活化条件下，溶媒对照组中各试验菌株回复突变菌落数均在正常范围内，阳性对照组各菌株回变菌落数均高于溶媒对照组，有显著性统计学差异（P≤0.05），表明试验系统可靠。注射用右旋雷贝拉唑钠每皿1 250μg剂量下，对菌株有明显抑菌作用（P≤0.05），每皿625μg剂量下有轻微抑菌作用（P≤0.05），每皿312.5、156和78μg剂量下无抑菌作用（P0.05）（表1）。在每皿78～1250μg剂量范围内各剂量组回变菌落数与溶媒对照组相比均无显著性增加，且未呈现剂量反应关系，表明注射用右旋雷贝拉唑钠无诱导鼠伤寒沙门氏菌基因突变作用，鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验为阴性。 2.2 组试验系统可靠 代谢活化和非代谢活化系统的条件下染毒6 h，非代谢活化系统的条件下染毒24 h，溶媒对照组染色体畸变率与阳性对照组比较，有统计学差异（P≤0.05），表明试验系统可靠。注射用右旋雷贝拉唑钠15、30、60μg/mL剂量下作用6 h,12、24、48μg/mL剂量下作用24 h，各剂量染色体畸变率与相对应的溶媒对照组比较，均无统计学差异（P0.05）（表2），且未呈现剂量反应关系，表明注射用右旋雷贝拉唑钠无诱导CHL染色体畸变作用，体外染色体畸变试验结果为阴性。 2.3 显著性统计分析 阳性对照组的PCE/（PCE+NCE）比值与溶媒对照组比较无统计学差异（P0.05),MNPCE高于溶媒对照组，有显著性统计学差异（P≤0.05），说明试验系统可靠。26、52、103 mg/kg剂量下，2次采样小鼠PCE/（PCE+NCE）比值、MNPCE分别与溶媒对照组比较，均无显著性增加（P0.05）（表3），表明注射用右旋雷贝拉唑钠在26～103 mg/kg剂量范围内无诱发小鼠骨髓细胞嗜多染红细胞微核率增高的作用，小鼠体内微核试验结果为阴性。 3 受试物的致突变作用 右旋雷贝拉唑钠是新型质子泵抑制剂，对反流性食管炎、胃溃疡等有显著疗效，是主要药效活性成分，有较好的应用前景 本研究的细菌回复突变试验，采用国内评价常用的5种组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌TA97a、TA98、TA100、TA1535和TA102菌株组合，对其进行基