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一例鸡死亡病例的诊断与分析 2019年11月，福泉市某鸡场发生17例死亡，发病率为17%，死亡率为6%。病鸡初期临床症状主要表现为精神沉郁，食欲减退，羽毛粗乱，随后部分病鸡出现共济失调，腿或翅膀单侧或双侧半瘫或全瘫，呈典型的“劈叉”姿势，排黄绿色稀粪，采食困难，脱水消瘦，突然死亡。剖检可见单侧坐骨神经肿大。根据临床症状尤其是神经症状和病理变化，初步诊断为神经型鸡马立克氏病。为了确诊感染病原，特进行实验室病原学诊断，现报道如下。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 疾病宣言 无菌采集病鸡的脑、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、关节囊积液作为检测病料。 1.1.2 荧光定量rt-pcr检测 禽流感病毒通用型荧光定量RT-PCR试剂盒、新城疫病毒荧光定量RT-PCR试剂盒，均购自北京世纪元亨生物科技有限公司;马立克氏病病毒荧光定量PCR试剂盒，购自深圳真瑞生物科技有限公司。 1.2 方法 1.2.1 相关病毒纯度检测 提取病鸡的肺脏、肝脏、脾脏、脑组织样品核酸，分别应用相应试剂盒进行禽流感病毒、新城疫病毒、马立克氏病病毒核酸检测。 1.2.2 上游引物的gcctctcgctctctctctrtga-3 提取病鸡关节囊积液样品核酸，采用鸡滑液囊支原体特异性引物(上游引物MS1:5’-GCCATTGCTCCTGCTGTTATA-3’;下游引物MS2:5’-GGGTAGTCCACTCGCATT-3’)进行滑液囊支原体PCR核酸检测。 1.2.3 细菌的分离和培养 无菌操作取病鸡肝脏、肾脏、心脏、脾脏组织，接种于血琼脂培养基，37℃培养16 h观察结果。 2 结果 2.1 病毒纯度检测结果 2.1.1 新城病病毒的原子检验 由图1可见:阳性对照Cq值为22，检测样品无特定扩增曲线且Cq值为0，提示组织样品中不存在新城疫病毒。 2.1.2 原子能病毒的原子检测 由图2可见:阳性对照Cq值为24，检测样品无特定扩增曲线且Cq值为0，提示组织样品中不存在禽流感病毒。 2.1.3 马丽克病病毒的原子检测 由图3可见:阳性对照Cq值为22，检测样品Cq值为26且有特定扩增曲线，提示样品中存在马立克氏病病毒。 2.1.4 鸡滑液囊杆菌的测定 由图4可见:检测样品未扩增出773 bp大小的目的条带，鸡滑液囊支原体核酸检测结果为阴性，提示检测样品中不存在鸡滑液囊支原体。 2.2 细菌分离和培养 3 结论 经实验室病原学检测，确诊本病例为马立克氏病病毒感染。 4 临床鸡马立克氏病疫苗种表现型临床预防 4.1 鸡马立克氏病是由疱疹病毒科的马立克氏病病毒引起的1种高度接触传染性、淋巴组织增生性肿瘤疾病，临床上以运动障碍、一腿或双腿麻痹、下痢等为特征，不同品种、日龄的鸡均可发病，以50～70日龄多见，各季节均可发生。本病表现型为4种类型:神经型、内脏型、眼型和皮肤型，内脏型和神经型多见 4.2 对于该病的防制，建议养殖场规范使用疫苗进行免疫，在雏鸡出生24 h内进行鸡马立克氏病疫苗皮下接种;发现病鸡立即扑杀，并对尸体进行无害化处理，鸡舍严格消毒，同群鸡进行隔离;进行种鸡净化和引种检测;加强饲养管理，注意微量元素和维生素的补充以提高鸡群免疫力;定期清洗和消毒鸡舍，合理安排鸡群饲养密度;注意避免人员活动带来的污染，外来人员进出要有消毒措施。 由图5可见:血琼脂培养基上无典型菌落生长，提示样品无细菌感染。