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铬对两栖动物的急性毒性研究 铬（cr）是自然界广泛存在的金属元素，具有一定的氧化形式。它主要以三价铬（cr（））和六价铬（cr（））的形式存在。由于铬在冶金、印染、制革等工业生产中被大量使用,其流失及无序排放对环境造成严重污染。水、空气和土壤中的铬可通过食物链富集作用对动物的生长发育产生严重的毒害。目前有关铬对于鱼、虾等水生动物以及哺乳动物的毒理研究报道较多(Arunkumaret al.,2000;Dillonet al.,2000;Paulet al.,2005),但对于两栖动物幼体的毒性研究则相对较少。两栖动物的生殖和幼体发育过程在水域中进行,其皮肤对于水中的离子具有较高的渗透性,因而在幼体发育过程中对有毒物质的反应较为敏感,是进行环境污染毒理学研究以及评价水域环境化学污染效力的理想材料之一。 近年来,随着生存环境的污染日趋严重,世界范围内两栖动物发生畸形的现象已经超过60种,其主要原因与紫外辐射、化学污染物和寄生虫感染有关(Andrew Pieter, 2003)。中国林蛙(Rana chensinensis)是广泛分布于中国北方各地的重要经济动物,本研究以野生中国林蛙蝌蚪为对象,研究水域中Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)对林蛙幼体的急性毒性及对生长发育的影响,以期为两栖动物幼体的生存环境保护提供参考数据, 同时为水域环境污染的治理提供依据。 1 材料和方法 1.1 重铬酸钾kcr2o7晶体的制备 Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)分别以氯化铬(CrCl3·6H2O)晶体和重铬酸钾(K2Cr2O7)晶体(西安化学试剂厂产品,AR)为溶质, 用蒸馏水按离子浓度分别配制成10 g·L-1Cr(Ⅲ)和10 g·L-1Cr(Ⅵ)的母液备用。 1.2 osng5:5 野生中国林蛙受精卵采集自秦岭北坡的大峪水库附近,实验室孵化,孵化水温(20±2)℃,pH 6.8～7.0,盐度1.8～1.9 g·L-1。待蝌蚪发育至28～29期(Gosner, 1960;郑晓晶和张育辉,2008),选用健康、大小一致的个体进行急性毒性实验。通过预实验后,Cr(Ⅲ)暴露设30、31、32、33、34和35 mg·L-16个浓度组;Cr(Ⅵ)设10、17、30、35、40和45 mg·L-16个浓度组;设1个对照组。每组20只蝌蚪,每个处理浓度设2个平行组,共40只。实验的前8 h连续观察,随后在12、24、48、72和96 h观察并记录蝌蚪中毒症状、死亡数,并及时清理死亡蝌蚪。实验用水为曝气2 d以上的自来水,24 h更换1次,暴露期间禁食。 1.3 gl-的检测方法 Cr(Ⅲ)暴露设0.50、1.00、2.00和3.00 mg·L-14个浓度组;Cr(Ⅵ)设0.25、0.50、0.75和1.00 mg·L-14个浓度组,设1个对照组,每个处理浓度设2个平行组,每组45例蝌蚪,水温20±3℃。每48 h换1次水,换水4 h后投食,饲喂蛋黄、豆渣和蔬菜。实验前受试蝌蚪为28～29期,体重0.0416～0.0506 g,全长(吻端至尾端)14.5～15.5 mm。每天观察并记录蝌蚪的死亡和畸形数。分别在暴露21和35 d时,测量体重和全长。最后统计从28～29期开始暴露到75%的个体完全变态所用的时间。 1.4 慢性毒性实验 急性暴露实验数据用中线性回归法分别计算Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)在24、48、72和96 h对蝌蚪的零致死浓度(LC0)、半致死浓度(LC50)和全致死浓度(LC100),安全浓度(SC)由公式SC=96h LC50×0.1计算(娄忠玉和钱续,2003)。慢性毒性实验数据用SPSS 16.0软件处理,用单因子方差分析(one-way ANOVA)检验不同浓度组蝌蚪的体重、全长及发育时间的显著性。数据以平均值±标准误差(X±SE)表示。P0.05 表示差异显著,P0.01表示差异极显著。 2 结果与分析 2.1 铬对林青蛙的快速毒性 2.1.1 gl-1对蝌蚪的急性毒性实验结果 在蝌蚪暴露于含Cr(Ⅲ)的水体中8h后,体表粘附一层絮状物质。同时在水体表面也出现一层油膜,12 h后成粉末状沉淀。在未放入蝌蚪的Cr(Ⅲ)水体中,96 h内未出现油膜及沉淀物。在33、34和35 mg·L-1的处理组,蝌蚪暴露8 h后出现中毒症状;在31和32 mg·L-1组,蝌蚪暴露12 h后出现中毒症状。蝌蚪中毒表现为呆滞,卧于水底,尾部颤抖,身体抽搐;轻者侧游,仰翻。蝌蚪死亡后僵直,仰翻。解剖死亡蝌蚪,肝脏、肠管呈灰白色,鳃萎缩,鳃丝被覆有与体表相似的白色絮状物。 比较不同Cr(Ⅲ)浓度与死亡率的关系可见,在相同暴露时间,蝌蚪死亡率随Cr(Ⅲ)浓度的增加而升高(表1,图1)。用中线性回归法计算Cr(Ⅲ)在24、48、72和96 h对蝌蚪的零致死浓度(LC0)、半致死浓度(