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美斯地浓磷脂复合物对大鼠肠吸收的影响 作为一种胆碱酯酶抑制剂，它主要用于治疗重症肌力，也可用于手术后的腹部肿胀和尿潴留。但由于MS 是高溶解性、低渗透性药物,其亲水性较强,脂溶性较低,生物利用度较低。鉴于此,本研究制备了美斯地浓磷脂复合物(mestinon-phospholipid complex,MSPLC),并利用大鼠在体肠吸收生物模型,对MSPLC的在体肠吸收情况进行初步研究,以推断磷脂复合物改善吸收的机制。 1 材料表面 1.1 s-4电子升温不锈钢水浴锅 HL-1恒流泵(上海青浦沪西仪器厂);HHS-4S电子恒温不锈钢水浴锅(上海康路仪器设备有限公司);DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器(巩义市予华仪器有限责任公司)。 1.2 试剂与标准曲线 MS(武汉远城科技发展有限公司,纯度99.6%);磷脂(国药化学试剂公司,含60%的磷脂酰胆碱);MSPLC(自制);甲醇(色谱纯,美国新天地科技有限公司);其余试剂为分析纯。 1.3 实验动物 清洁级SD大鼠6只,雄性,体质量(300±20) g,实验前未使用过其他药物(重庆医科大学实验动物中心提供)。 2 方法和结果 2.1 -甲基-5-甲氧基-5-羟基苯甲酸稀溶液的配制 取MS与磷脂(质量比8:1),加入适量乙醇溶解稀释至MS浓度为4 mg/mL,置40℃水浴搅拌2 h,减压除去反应溶剂,然后加入适量的乙醚,充分溶解其中的磷脂及磷脂复合物,过滤,再用少量的乙醚洗涤。合并滤液及洗液,回收乙醚,剩余物减压干燥得MSPLC。 2.2 ms-磷酸盐复合率m MS的初始投药量(X0)与沉淀量(X1)的差值即为与磷脂结合的MS量,从而计算出MS与磷脂的复合率,计算公式如下: 复合率=X0?X1X0×100%=X0-X1X0×100% 结果MSPLC复合率为(84.02±1.68)%,证明MS与磷脂形成了磷脂复合物,且复合率较高。 2.3 mspc的物理和化学性质 2.3.1 ms的dsc图谱 分别取MS、磷脂、MS与磷脂物理混合物以及MSPLC适量,置于铝质样品坩埚中,采用DSC法进行热分析。测定条件:温度0~300℃,升温速度10℃/min,气氛为氮气。DSC图谱见图1。 由图1可知,MS在160.8℃及256.4℃两处有吸收峰,第一个峰非常尖锐,可能是MS的熔点峰,而第二个峰可能是MS的裂解峰。MS与磷脂物理混合物的DSC图谱几乎是MS与磷脂的叠加,而MSPLC的DSC图谱中,MS的吸收峰消失,且相变温度比磷脂低,表明MS和磷脂间存在分子间相互作用。 2.3.2 紫外扫描图谱 将MS及MSPLC溶于乙醇,在200~400 nm波长范围内进行紫外扫描。紫外扫描图谱如图2。 实验结果表明, MSPLC与MS的紫外光谱相似,表明MS与磷脂之间作用很微弱,且MSPLC的发色基团结构没有发生改变。 2.3.3 扫描结果分析 采用KBr压片法分别对MS、磷脂、MS与磷脂物理混合物以及MSPLC在400~4 000/cm频数范围内进行扫描,结果如图3所示。 实验结果表明,MS与磷脂的物理混合物与MSPLC的傅里叶-红外扫描图谱有明显的不同,前者基本上是MS与磷脂图谱的叠加,而MSPLC图谱中,MS的一些吸收特征峰消失,但并没有新的吸收峰产生,这说明MS与磷脂形成的复合物是通过微弱的氢键或范德华力结合,并未形成新的化合物。 2.3.4 最佳配方的测定 将MSPLC混悬于5 ml双蒸水中,应用激光粒度仪(英国Malvern公司)测定其粒径及zeta电位,实验结果表明,按照最佳优化处方制备的MSPLC平均粒径为(204.6±0.3) nm (n=3),zeta电位为(-25.12±0.16) mV (n=3),粒径分布基本符合正态分布。 2.4 ms循环液的配制 MS循环液:精密称取干燥至恒质量的MS 25 mg,用20 μg/mL的酚红Krebs-Ringer小肠营养液溶解后,定容,配制成质量浓度为50 μg/mL的MS循环液。 MSPLC循环液:取含25 mg MS的MSPLC于烧杯中,用20 μg/mL的酚红Krebs-Ringer液溶解后,定容,配制成质量浓度为50 μg/mL的MSPLC循环液。 2.5 重量法的建立 2.5.1 酚红浓度的测定 按大鼠小肠吸收常规实验方法,在肠循环液中加入定量酚红,用紫外-可见分光光度法在558 nm波长处测定酚红浓度。酚红不被小肠吸收,可用来测定小肠吸收的水分量,以准确计算小肠吸收的药物量。光密度(D)与酚红(C)的标准曲线方程为:D=0.019 1C-0.089 4(r=0.999 8,n=3),线性范围为21.2~47.7 μg/mL。 2.5.2 测定条件的确定 MS和酚红混合溶液的紫外扫描图如图4所示。为了消除酚红对测定的影响,本实验采用双