棕鞭毛虫牧食作用对铜绿微囊藻种群的影响.docxVIP

棕鞭毛虫牧食作用对铜绿微囊藻种群的影响 微囊藻是一种全球分布的绿藻。绿藻也被称为绿细菌，是地球上首次出现的一种自由生物。在漫长的进化过程中，这些生物发展了独特的形状和生理生化机制，可以在各种各样的栖息地中产生，包括极端恶劣的环境。因此，它们比其他生物具有一定的生存优势。如果环境条件适宜，一些绿藻可以快速生长。通过达到一定的生物量，这些藻类聚集在水体表面，形成一层薄薄的藻类，并形成一个可以看到的藻类聚集。近年来，在环境和水环境良好的国家，如欧洲和美国，藻类水华的发展趋势越来越高。由于蓝藻水华引起的环境和健康问题，世界各国都高度重视。铜绿微藻通常沉积在中国的许多平湖中，形成有毒水华。通过分离和转化，在实验室培养纯培养后，这种群体的形状往往消失。虽然生物量很大，但仍能保持细胞的形状，很难恢复外部水生花卉的特征。目前，对微藻表面变化的机制缺乏充分的理解。从物质关系的角度来看，我们推测微囊藻集团形成的原因。一些研究表明，这种群体可能是防止微囊藻形成的策略之一。一些研究表明，对后代浮游生物的饲料不能刺激微囊藻的形成，而原始微囊藻的饲料可以鼓励微囊藻。一些细胞构成的前生动物鞭毛虫的饲料可以刺激微囊藻。与最初的细胞相比，重囊藻可以形成由数十到数百个细胞组成的防御集团。微囊藻可以形成一个由多个细胞组成的防御集团。与这种突然的发现一致。在这种情况下，微囊藻作为一个整体的发展，与最初的细胞相比具有不同的细胞表面和细胞外碳含量的显著变化。在这种情况下，可以进一步推测，在群体形成过程中，微囊细胞的活动也会发生变化。酯酶活性可以从一般意义上反映细胞的代谢活动，而叶片的相对强度可以表示相对较高的叶色含量。因此，这项工作中使用的流质细胞仪可以快速检测到经过棕鞭毛虫饲料后的微藻指数的变化，并结合这些指标的变化来分析微囊藻的诱导防御。 1 材料和方法 1.1 藻种的培养 有毒铜绿微囊藻由中国科学院水生生物研究所藻种库提供,采用BG-11培养基培养,培养温度为25℃,光照强度为2200lx,光照周期为L:D=12:12. 1.2 大麦粒的制备 试验用棕鞭毛虫(Ochromonas sp.)分离自太湖梅梁湾样品,用经60℃温水处理的大麦粒培养,培养温度为25℃,室内自然光照强度及光周期. 1.3 铜绿微囊藻的检测 取指数期铜绿微囊藻100ml置于250ml锥形瓶中,加入棕鞭毛虫,密度为6000ind./ml.棕鞭毛虫培养物在使用前24h加入适量浓度青霉素(0.5mg/ml,Penicillin G Sodium Salt,Sigma)和链霉素(1mg/ml,Streptomycin Sulfate,Bio Sharp)去除细菌.对照组为不添加任何浮游游动物的纯培养铜绿微囊藻,铜绿微囊藻的初始密度为5.53×106cells/ml.每组设3个重复,置于LRH-400-G光照培养箱中,试验条件同上,每天定时对上述实验培养物摇匀3次,试验为期9d.期间每隔一天取样一次,在显微镜下计数、观察形成的群体并用蔡氏显微镜进行显微摄影. 1.4 铜绿微囊藻酯酶活性的测定 每两天对棕鞭毛虫牧食处理组和对照组的3个平行分别取样2ml,充分振荡后用300目网布过滤后,用FDA对藻样进行染色后,上流式细胞仪(FACSVantage SE,Becton Dickinson,USA)进行检测.通过FDA(Fluorescein diacetate,Sigma,F-7378)染色,可以对铜绿微囊藻酯酶活性进行测定.将FDA用丙酮稀释到1mmol/L,-18℃保存.染色条件为:FDA浓度为25μmol/L,染色8min.流式细胞仪为双激光配置:第一激光为Coherent水冷氩离子激光器(激发波长为488nm),产生的荧光信号通过2个检测通道被收集(FL1:530/30nm,FDA荧光;FL3:675/20nm,叶绿素a荧光).检测指标分别为:FL1(酯酶活性)、FL3(叶绿素荧光强度)和FSC(细胞大小),通过这些指标的检测判断微囊藻在棕鞭毛虫牧食压力下群体形成过程中藻细胞活性变化以及生理状况. 2 结果 2.1 群体形成的影响 在棕鞭毛虫直接牧食处理组中观察到了铜绿微囊藻有群体形成,诱发形成的群体大多数仅有几个到几十个细胞构成(图1),在有些锥形瓶底部还出现了聚合在一起的较大群体,和以前观察的结果相似. 2.2 两组微囊藻生物量的比较 在棕鞭毛虫牧食处理组中,铜绿微囊藻种群逐渐下降,从第2d起生物量就显著低于对照组(P0.05,图2).随着实验的进展,对照组和棕鞭毛虫牧食处理组的微囊藻生物量差距越来越大.但在实验临近结束时,对照组微囊藻种群基本不再增长,接近饱和期,而棕鞭毛虫牧食处理组的微囊藻种群也基本不再下降,维持相对稳定的水平. 2.3 fl3测定 从图3可以看出,加入棕鞭毛虫牧食的处理组