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云锦杜鹃化学成分研究 杜鹃花是杜鹃科的一种花卉植物。生于海拔620~3 000 m的山脊阳处或林下, 原产我国长江流域及华南地区, 为我国特有的珍稀树种。具有清热解毒, 生肌敛疮的功效。临床上用于治疗消化道出血、衄血、咯血、月经不调、炎症等。目前国内外对云锦杜鹃的研究仅涉及群落学、植物学、园林学, 仅有的1篇有关黄酮类成分的研究也只是用极少量的样品比较了根、茎、叶3个部位质量分数的差异, 而并未对黄酮类化学成分进行分离和结构研究, 对云锦杜鹃开发利用的指导作用相当有限, 其药用价值还未被广泛认识。本实验对云锦杜鹃的化学成分进行研究, 为进一步的药理活性筛选提供物质基础。从95%乙醇提取物的醋酸乙酯部位中分离得到12个化合物, 分别鉴定为山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷 (3-O-α-L-rhamnopyranoside, 1) 、槲皮苷 (quercitrin, 2) 、杨梅树皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷 (myricetin-3-O-α-L-rhamnoside, 3) 、反式咖啡酸 (trans-caffeic acid, 4) 、顺式咖啡酸 (cis-caffeic acid, 5) 、 (2R, 3S) -6, 8-di-C-methyldihydro-kaempferol (6) 、秦皮素 (fraxetol, 7) 、原儿茶酸 (protocatechuic acid, 8) 、槲皮素 (quercetin, 9) 、山柰酚 (kaempferol, 10) 、杨梅素 (myricetin, 11) 、梫木毒素I (grayanotoxin I, 12) , 所有化合物均为首次从云锦杜鹃中分离得到, 其中化合物1~8、10首次从杜鹃花属中分离得到, 化合物3~7首次从杜鹃花科中分离得到。 1 仪器、试药与仪器 高效液相色谱仪 (日本日立公司) :HITACHI pump L—2130、UV Detector L—2400、DIONEA p680 HPLC pump、DIONEA UVD 170μm, 半制备反相色谱柱 (日本YMC公司) :YMC-pack ODS-A, 250 mm×10 mm, 5μm, Bruker AM—400核磁共振仪 (瑞士布鲁克) ;ZF—6三用紫外分析仪 (上海嘉鹏科技有限公司) , WZ—100旋转蒸发器 (上海申生科技有限公司) ;RE—201C恒温水油浴锅、SHZ—DIII循环水真空泵、DLSB 5L/25低温冷却液循环泵 (巩义市予华仪器有限责任公司) 。柱色谱硅胶100~200目、200~300目、硅胶H (青岛海洋化工厂) , 薄层色谱硅胶预制板GF254 (烟台市化学工业研究所) , 反相板 (德国默克公司) , Sephadex LH-20 (Sigma) , ODS (12~50μm, 日本YMC公司) , MCI GEL (75~150μm, Mitsubishi Chemical Corporation) , 其他试剂为分析纯或色谱纯。 云锦杜鹃于2010年6月采自湖北恩施, 由华中科技大学同济药学院姚广民副教授鉴定为杜鹃花科杜鹃花属植物云锦杜鹃Rhododendron fortunei Lindl.枝叶, 标本 存放于华中科技大学同济药学院天然药物化学实验室。 2 氯质量及洗脱 阴干后的云锦杜鹃枝叶6 kg, 适度粉碎, 95%乙醇室温浸泡提取5次, 每次24 h, 回收溶剂后得到醇提总浸膏 (900 g) 。将总浸膏用适量热水分散后, 依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇萃取数次, 减压浓缩得石油醚部分165.2 g, 氯仿部分130.8 g, 醋酸乙酯部分31.0 g, 正丁醇部分365.1 g。醋酸乙酯部分 (31.0 g) 经硅胶柱色谱, 依次用氯仿-甲醇 (100∶1、50∶1、20∶1、10∶1、5∶1) 梯度洗脱。所得流分经TLC检测合并后, 反复正相硅胶柱、薄层色谱硅胶H、Sephadex LH-20凝胶柱、反相RP-C18柱色谱纯化, 得到化合物1 (2 mg) 、2 (2.2mg) 、3 (30.7 mg) 、4 (8.6 mg) 、5 (12.2 mg) 、6 (14.6 mg) 、7 (2.9 mg) 、8 (14.7 mg) 、9 (4.7 mg) 、10 (12.4 mg) 、11 (14.1 mg) 、12 (5.4 mg) 。 3 鉴定化合物1为山酚-3-o--l-鼠李糖苷 化合物1:黄色粉末 (甲醇) , 5%硫酸-乙醇显色呈鲜黄色, Fe Cl3-K3[Fe (CN)6]、HCl-Mg、Molish反应阳性。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ:12.60 (1H, s, 5-OH)