尼古丁乙醇脂质体的制备与体外透皮特性研究.docxVIP

? ? 尼古丁乙醇脂质体的制备与体外透皮特性研究 ? ? 王 慧，张晓红，张 燕，杨苗苗，权 伟，戴尊孝（西安市精神卫生中心，西安 710061） 随着吸烟人数与日俱增，死于与吸烟有关疾病的人数也随之增加[1]。为此，世界卫生组织（WHO）提倡并于1996年向各国推荐了尼古丁替代法[2]。尼古丁替代法是采用非烟草的方式，向戒烟者提供小剂量安全性好的尼古丁制剂，使戒烟者尼古丁的摄取量达到最低，最终戒除香烟[3]。尼古丁是烟草的重要成分，研究表明，人体摄取尼古丁，反应性及注意力一定程度有所提高，焦虑明显降低[4]。尼古丁易透过人体皮肤，但其本身性质不稳定，很大程度上限制了其在药物研发中的应用。 乙醇脂质体凭借其良好的包封率及柔性，可携带药物进入皮肤深层，是皮肤局部用药较理想的载体[5]。为此，本实验研制了尼古丁乙醇脂质体并通过体外透皮实验研究其体外释药及透皮行为。 1 材料 1.1 仪器 高效液相色谱系统（日本岛津公司）；JEM-1200EX型透射电镜（日本电子公司）；激光动态光散射仪（英国马尔文仪器有限公司）；Tcs Sp2型激光共聚焦显微镜（德国徕卡公司）；RYJ-6B型药物透皮扩散试验仪（上海黄海药检仪器厂）；RC-3B药物溶出仪（天津大学无线电厂）；RE-52AA型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）。 1.2 药品与试剂 尼古丁原料药（重庆博腾制药科技股份有限公司，批号：130211，纯度：＞96%）；大豆磷脂（PC，常州四药制药有限公司，批号：1208S02，含量：90%）；罗丹明B（美国Sigma公司）；水为去离子双蒸水。 1.3 动物 昆明种小鼠，♂，体质量为18～20 g，由兰州大学动物实验中心提供，合格证号为SCXK（甘）14-006。 透析袋（上海通善生物科技有限公司，截留分子质量：8 000～14 000）。 2 方法与结果 2.1 尼古丁乙醇脂质体的制备 采用注入法[6]制备尼古丁乙醇脂质体。精密称取尼古丁原料药0.3 mg、磷脂适量、乙醇4.5 ml，溶解，置于磁力搅拌器上，在密闭条件下边搅拌边缓慢注入5.5 ml磷酸盐缓冲液（PBS），搅拌30 min（整个过程温度保持在45～55 ℃范围内）；超声20 min后，冷却至室温，微孔滤过，即得尼古丁乙醇脂质体。其中尼古丁含量为3%。采用透射电镜观察所制尼古丁乙醇脂质体的外观形态，结果显示，尼古丁乙醇脂质体外观为均一稳定的分散体系，大多数呈球形的双分子层囊泡结构，详见图1。 图1 尼古丁乙醇脂质体的电镜照片（×110 000）Fig 1 SEM photograph of nicotine ethosome（×110 000） 2.2 尼古丁脂质体和尼古丁乙醇溶液的制备 采用反相蒸发法制备尼古丁含量为3%的尼古丁脂质体。将尼古丁原料药溶于乙醇溶液中，制备尼古丁含量为3%的尼古丁乙醇溶液。 2.3 乙醇、磷脂用量对乙醇脂质体粒径和包封率的影响 由预试验可知，尼古丁乙醇脂质体受乙醇用量（占处方量的比例，V/V）和磷脂用量（占处方量的比例，m/V）的影响最大。本试验采用单因素试验考察0、25%、35%、45%乙醇和1%、2%、3%磷脂对尼古丁乙醇脂质体粒径和包封率的影响，粒径采用激光动态光散射仪测定，结果见表1。 表1 乙醇、磷脂用量对尼古丁乙醇脂质体粒径和包封率的影响（）Tab 1 Effects of the amounts of ethanol and phospholipid on the particle size and encapsulation efficiency of the nicotine ethosome（） 表1 乙醇、磷脂用量对尼古丁乙醇脂质体粒径和包封率的影响（）Tab 1 Effects of the amounts of ethanol and phospholipid on the particle size and encapsulation efficiency of the nicotine ethosome（） 由表1可见，与不含乙醇的处方10比较，加入乙醇的脂质体的粒径明显减小，包封率均增加。另外，固定乙醇浓度，增加磷脂含量，脂质体的粒径逐渐增大，包封率也随之增加；固定磷脂含量，增加乙醇浓度，脂质体的粒径逐渐减小，包封率逐渐增加。研究表明，粒径越小，包封率越大，脂质体越易携带药物经皮渗透[7]。因此筛选乙醇脂质体的处方为乙醇用量为35%，磷脂用量为3%。 2.4 尼古丁的含量测定 2.4.1 色谱条件 色谱柱：VP-ODS C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.02 mol/L醋酸铵-三乙胺（30 ∶60 ∶0.1，V/V/V），流速：1 ml/min；检测波长：365 nm；进样量